第二十五章：厌氧菌及检验.pptVIP

掌握厌氧芽胞梭菌的生物学特性 掌握厌氧芽胞梭菌的检验程序 掌握厌氧菌的培养方法 熟悉常用厌氧菌鉴定试验 厌氧菌的概念与分类 厌氧菌是指有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌。 根据结构分厌氧芽胞梭菌和无芽胞厌氧菌 厌氧芽胞性梭菌属包括130个种的细菌。 无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种。 临床症状 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏死，皮下有捻发音，是产气夹荚膜梭菌感染的特征 分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂片经革兰染色，发现细菌，而培养阴性 发生在粘膜附近的感染 深部外伤 厌氧菌标本的采集和送检 标本的采集和送检 1、标本决不能被正常菌群污染； 2、应尽量避免空气 3、培养的最佳标本为组织标本 标本的采集 标本的送运与处理 针筒运送法 无菌小瓶运送法 棉拭运送法 标本充盈运送法：适合大量液体标本的运送 组织块运送法 厌氧袋运送法 分离鉴定程序 一、破伤风梭菌 （一）形态与染色 菌体细长，有周身鞭毛、无荚膜。形成芽胞后，使细菌呈鼓槌状。G＋。 （二）培养特性 严格厌氧 血平板上，有β溶血 菌落2-4mm，扁平，半透明，灰白色，边缘不齐，周边呈疏松羽毛状 生化反应 不发酵糖类，分解蛋白质 液化明胶，产生H2S 多数菌株吲哚阳性 不还原硝酸盐 对蛋白质有微弱的消化作用 芽胞抵抗力很强 75～80℃ 10 min仍保持活力 100℃ 1小时可完全被破坏 在干燥的土壤和尘埃中可存活数年 破伤风痉挛毒素 分子量约150 kDa；B链（重链）是与神经节苷脂结合的单位；A链（轻链）具有毒性作用。 破伤风典型症状 破伤风免疫属外毒素免疫，主要是抗毒素发挥中和作用。 一般病后不会获得牢固免疫力。 获得有效抗毒素的途径是人工免疫。 一般不进行涂片、镜检和分离培养。 典型的症状和病史即可作出诊断。 1.正确处理创口及清创、扩创。 2.注射白百破三联疫苗进行人工主动免疫。 3.对可疑病人可立即注射破伤风抗毒素（tetanus antitoxin, TAT）进行紧急预防。 4.发病早期可足量使用抗毒素进行特异性治疗。 5.抗生素。 二、产气荚膜梭菌 (C．perfringens ) （二）培养特性 厌氧，繁殖周期为8分钟。 血琼脂平板上，圆形，凸起，表面光滑，边缘整齐。 双层溶血：内环完全溶血-θ毒素 外环不完全溶血- α毒素 Nagler反应 蛋黄琼脂平板上，由于此菌产生的卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂，被特异性的抗血清所中和，使菌落周围出现乳白色混浊圈，Nagler反应； 汹涌发酵 代谢活跃，分解多种糖类，产酸产气。在牛乳培养基中分解乳糖，大量产气，将棉塞冲开，气势凶猛，出现所谓“汹涌发酵”（stormy fermentation）。 生化反应 发酵多种糖产酸产气 液化明胶 产生H2S 吲哚阴性 致病物质 产气荚膜梭菌能产生10余种外毒素，有些外毒素即为胞外酶。 （一）致病物质 组织坏死 致病物质 所致疾病 产气荚膜梭菌 （一）直接涂片镜检 深部创口取材涂片 G＋大杆菌，大荚膜 白细胞甚少且形态不典型 伴其它杂菌 （二）分离培养及动物实验 血平板，镜检及生化反应 动物实验 本菌引起的食物中毒在发病后1日内，检出大于105病菌/克食品或106病菌/克粪便，即可确立诊断。 （一）预防 及时处理伤口，破坏和消除厌氧微环境。 预防性的使用抗生素。 （二）治疗 局部扩创，清创 抗生素 α抗毒素 高压氧舱法 三、肉毒梭菌 （C．botulinum） G＋粗短杆菌。芽胞呈椭圆形，使细胞呈汤匙状或网球拍状。厌氧。肉毒毒素不耐热，煮沸1分钟即可被破坏。 （一）致病性 肉毒毒素（对人致死量为0.1 μg）。 肉毒毒素作用于外周胆碱能神经，抑制神经肌肉接点处神经介质乙酰胆碱的释放，导致弛缓性麻痹。 肉毒毒素减肥 （二）所致疾病 1.食物中毒 本病是单纯性毒素中毒而非细菌感染， 临床表现与其它食物中毒不同，主要为神经 末稍麻痹。 2.婴儿肉毒病 鉴定依据： 涂片镜检为革兰阳性近极端芽胞，呈汤匙状 厌氧，消化肉渣变黑，产生恶臭味 菌落边缘有皱褶 肉毒毒素测定阳性 加强食品