蚜虫全蛋白提取方法的比较研究.pdfVIP

环 境 昆 虫学 报JournalofEnvironmentalEntomology，June2010，32(3)：353—356 ISSN1674-0858 doi：10．3969／i．issn．1674—0858．2010．03．010 蚜虫全蛋白提取方法的比较研究 安少利，潘怡欧，许 鹏 ，张炬红，席景会 (吉林大学植物科学学院，长春 130062) 摘要：为建立适于 SDS—PAGE分析的蚜虫蛋白质样品制备平台，以便为蚜虫蛋白质的双向电泳分析奠定基础，本 研究比较了TCA／丙酮沉淀、PEG提取、饱和酚抽提和直接裂解4种蛋白质提取方法。结果表明：不同样品制备方 法的蛋白提取率有显著的差异，其中直接裂解法的提取率最高，为 17．43ms／g；其次是饱和酚抽提法，提取率为 12．30ms／g；而PEG制备法提取率最低，只有7．96ms／g。利用SDS—PAGE电泳对不同的蛋白质样品进行了分析 ， 发现在凝胶图谱上显现的条带也有明显的差异，其中饱和酚抽提法显现的条带数最多，为36条，且从 14．4kDa～ 116．0kDa范围有广泛分布，条带清晰；PEG提取法条带数为30条，一些蛋白条带丢失或不明显；TCA／丙酮沉淀法 的蛋白条带集中分布在25．0kDa一67．0kDa区域；直接裂解法条带数仅为24条，且小分子量的条带可辩率很低。 通过以上结果可以得出，饱和酚抽提法最适用于蚜虫全蛋白样品的制备。 关键词：蚜虫；蛋 白提取 ；电泳 中图分类号：Q966 文献标识码：A 文章编号：1674-0858(2010)03-0353-04 A comparisonofproteinextractionmethodssuitableforaphidproteins ANShao—Li，PANYi—Ou，XUPeng，ZHANGJu—Hong，XIJing—Hui(CollegeofPlantScience，JilinU- niversity，Changchun130062，China) Abstract：Toestablishasuitablepreparationplatform ofaphidproteinsampleforSDS—PAGE analysis， wecomparedfourprotein extractionmethods：TCA／acetoneprecipitation，PEG，saturatedphenol，and directdecompositionmethod．Theresultsindicatedthat，extractionrateofdifferentproteinpreparation methodsweresignificantdifferentbystatisticalanalysis．Thedirectdecompositionmethodpresentedthe highestyieldof17．43mg／g，followedbythesaturatedphenolextraction，12．30mg／g．TheyieldofPEG extractionmethodwasthelowest。only7．96mg／g．Therewasalsoanobviousdifferenceinproteinbands ofsamplesfrom differentproteinpreparationmethods．analyzedbySDS—PAGE electrophoresis．Thesat— uratedphenolextractionmethodshowedmost，36bands。broadlyandclearlydistributingrfom 14．4kDa to116．0kDarange．ThePEG extractionmethodshowed30proteinbands．anumberofbandswaslostor becameunapparent．ProteinbandsofTCA／acetoneprecipitationmethodconcentratedinthe25．0kDa一 67．