薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立-中国农学通报.pdfVIP

中国农学通报 2014,30(19):98-104 Chinese Agricultural Science Bulletin 薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立 黄雅芳，杨瑞，王志忠，王建立，季玉杰，王 璐，赵珈锐， 潘高扬，李维根，王嘉兴，刘竹慧，盛鹏飞，郝敬虹 （北京农学院植物科学技术学院/农业应用新技术北京市重点实验室，北京102206） 摘 要：为建立适宜的薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳的试验体系，以‘京蜜11 号’薄皮甜瓜为试材，从 果实总蛋白质的提取方法、等电聚焦条件、IPG胶条梯度等方面进行了探索优化。结果表明，酚-甲醇/醋 酸铵沉淀法能够高效的提取薄皮甜瓜果实总蛋白质，选用24 cm pH 4~7 的IPG 胶条，800 μg 上样量， 120000 Vhs 聚焦，SDS电泳后采用胶体考马斯亮蓝染色。该优化的体系可以获得背景清晰、分辨 率高、重复性好的双向电泳图谱。 关键词：薄皮甜瓜；果实；蛋白质；双向电泳；条件优化 中图分类号：S652 文献标志码：A 论文编号：2014-0694 TheEstablishmentofOptimizationalTwo-dimensionalElectrophoresisSystemforMelonFruit HuangYafang,YangRui,WangZhizhong,WangJianli,JiYujie,WangLu,ZhaoJiarui, PanGaoyang,LiWeigen,WangJiaxing,LiuZhuhui,ShengPengfei,HaoJinghong (CollegeofPlantScienceandTechnology,BeijingUniversityofAgriculture/ BeijingKeyLaboratoryforAgriculturalApplicationandNewTechnique,Beijing102206) Abstract: Toestablishanappropriatetwo-dimensionalelectrophoresissystemofmelonfruit,thevarietyof Cucumismelo ‘Jingmi11’wasusedasmaterial,parametersincludingproteinsamplepreparation,isoelectric focusingconditionandthepHgradientofIPGstripwereoptimized.Theresultshowedthattheoptimized system included the following steps: extracting the total protein from melon fruit by phenol-methanol/ ammoniumacetate,separatingtheproteinswith24cmpH4-7IPGstrips,loadingproteinsamplesof800μg, 120000VhsisoelectricfocusingandstainingthegelsbycolloidalcoomassiebrilliantbluestainingafterSDS- PAGEelectrophoresis.Clearbackground,reproducibleprofileswithhighresolutionwereobtainedbythis optimized2-DEsystemofmelonfruit. Keywords:melon;fruit;protein;two-dimensionalelectrophoresis(2-DE);conditionoptimization 0 引言 的重要技术手段。园艺作物“全部蛋白质”的分析技术 蛋白质组学分析是后基因组时代分析生物学功能 还不够成熟[