第3章酶 2013 本科生用 秋.ppt

Enzyme;主要内容;生物催化剂－－酶的重要性;酶学研究简史;第一节酶的分子结构与功能;酶的不同形式;一、酶的分子组成;辅助因子与酶蛋白结合紧密程度不同;1、小分子有机化合物;;最常见，2/3的酶含有金属离子，如K+、 Mg2+、Cu+/2+、Zn2+、 Mn2+、 Ca2+、 Fe2+等。;金属离子的作用： 参与组成活性中心，利于底物的定向排列，利于催化； 作为连接酶与底物间的桥梁； 中和电荷，降低静电斥力 ； 稳定酶的构象。;酶的活性中心 (active center)——指酶分子中能与底物特异地结合并催化底物转变为产物的具有特定三维结构的区域。;——指酶分子中与酶活性密切相关的化学基团。 如：咪唑基、羟基、巯基、羧基等。;1、活性中心内的必需基团;酶的活性中心通常形成“裂隙或口袋”;指位于活性中心以外，为维持酶活性中心的空间构象和（或）作为调节剂的结合部位所必需的基团。;底 物 ;三、同工酶;H;; 不同组织的同工酶谱不同。临床上检测血清中同工酶活性、分析同工酶谱有助于疾病的诊断和预后判定。 ;举例 1：LDH同工酶应用;举例 2：肌酸激酶 ( CK) 同工酶应用;第二节 酶的工作原理;在反应前后没有质和量的变化； 只能催化热力学允许的化学反应； 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。;一、酶促反应的特点;一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一种的化学反应并产生一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或专一性。;酶的特异性可分为2种类型：;（三）酶促反应的可调节性;二、酶促反应的机制——促进形成过渡态;活化能：底物分子从基态转变到过渡态所需的能量。（过渡态分子所具有的高出底物水平的能量） 酶比一般催化剂更有效地降低反应的活化能。;酶能更有效地降低反应的活化能;E + S;诱导契合作用使酶与底物密切结合;;邻近效应与定向排列使底物正确定位于活性中心;酶的活性中心多是疏水“口袋”。疏水环境使底物分子脱溶剂化，排除水对功能基团的干扰性吸引和排斥，防止水化膜的形成，利于底物与酶分子的密切接触和结合。这种现象称为表面效应。 ;酸－碱催化作用：酸、碱基团通过提供质子或接受质子，提高催化效率。 共价催化作用：酶与底物形成反应活性很高的共价过渡产物，使反应活化能降低，从而提高反应速度的过程。 亲核催化作用：亲核基团提供电子给带正电荷的中间物。;小 结;第三节 酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction ;酶促反应动力学：研究酶促反应速度及其影响因素的一门科学 。 影响因素包括：底物浓度、酶浓度、 pH、温度、抑制剂、激活剂等。;反应速度：用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。 酶促动力学所研究的反应速度：通常为初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速率。;一、底物浓度对酶促反应速度的影响; Henri和Wurtz提出了中间产物学说（1903年）;当底物浓度较低时;;当底物浓度高达一定程度;;方程描述了底物浓度与反应速度之间的关系;单底物反应；初速度；逆反应可不考虑。反应速率为 V = k3[ES]。 (1) [S][E]，故在反应初始阶段，S的浓度可认为不变；反应中[游离E]＝[E]－[ES] 。;米－曼氏方程式推导过程：;将(3)代入(1)V = k3[ES]得;当反应速率为最大反应速率一半时：; Km是酶的特征性常数之一，只与酶的性质、酶所催化的底物和酶促反应条件（如温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 酶的Km多在10－6～10－2mol/L Km在一定条件下可表示酶对底物的亲和力；;56; Vmax是酶被底物完全被饱和时的反应速度 Vmax与[E]成正比。 V = k3 [ES] Vmax = k3 [E];Lineweaver- Burk双倒数作图法;小 结;当底物充足时，[S]＞＞[E]，酶被底物饱和（ [ES] =[E]），反应速率达最大速率，此时V与[E]成正比。 关系式为：V = k3 [E];三、温度对酶促反应速度的影响;最适温度－－酶促反应速率最快时反应体系的温度称为酶促反应的最适温度(optimum temperature)。一般35～40℃；有耐热酶。;四、pH对酶促反应速度的影响;机制－－pH影响了酶分子、底物分子和ES复合物的解离状态；过高、过低的pH导致酶蛋白变性。 最适pH－－酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适pH (optimum pH)。多数酶的最适pH接近中性；胃蛋白酶则为1.8。 最适pH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。;65;五