着床前遗传学诊断后囊胚冻融的实验研究与临床应用.PDFVIP

第 32 卷第 3 期Vol.32, No.3 生 殖 与 避 孕 http://www.RandC.cn 2012 年 3 月Mar. 2012 Reproduction Contraception reproduction_journal@ ·临床报道· 着床前遗传学诊断后囊胚冻融的 实验研究与临床应用 黄 锦 廉 颖 郑晓英 吴昱琪 陈 媛 乔 杰 刘 平 (北京大学第三医院妇产科生殖医学中心, 辅助生殖教育部重点实验室, 北京, 100191) 【摘要】目的: 探讨着床前遗传学诊断(PGD)后囊胚冻融的特点及临床应用。方法: ① 实验研 究: 对41 枚PGD 诊断为遗传学异常的废弃囊胚进行冻融研究, 其中27 枚囊胚进行程序化冻 融, 14 枚囊胚进行玻璃化冻融。分别观察囊胚冷冻前及解冻后的形态学特点, 比较2 种冻融 方法的囊胚解冻复苏率。② 临床应用: 对14 对夫妇在PGD 新鲜周期移植后仍有剩余的遗传 诊断正常的40 枚囊胚给予冷冻保存。其中, 6 对夫妇的12枚胚胎进行了解冻移植。结果: ① 实验 研究: 27 枚进行程序化冻融的囊胚解冻后复苏22 枚, 复苏率为81.48%(22/27); 14 枚进行玻 璃化冻融的囊胚解冻后复苏 11 枚, 复苏率为78.57%(11/14), 2 种冻融方法的囊胚解冻复苏 率无统计学差异(P0.05) 。无论何种冻融方法, 解冻后复苏存活的囊胚在体外培养30 min 均 可以观察到复苏现象, 体外培养4 h 囊腔均扩张。② 临床应用: 14 对有剩余囊胚冻存的夫妇 中, 6 对夫妇新鲜周期即获得临床持续妊娠, 另外还有1 对夫妇早期自然流产, 1 对夫妇宫外 孕。其余新鲜周期未孕的 6 对夫妇进行了囊胚解冻移植, 其中3 对夫妇解冻周期获得了临床 妊娠。结论: 经PGD 诊断后的囊胚, 无论是程序化冻融还是玻璃化冻融, 均可以获得满意的 解冻复苏率。PGD 诊断后囊胚冻融技术的成熟与发展可以提高PGD 夫妇的累积妊娠率。 关键词: 着床前遗传学诊断(PGD); 囊胚; 程序化冻融; 玻璃化冻融; 复苏率 中图分类号: Q715.5 文献标识码: A 文章编号: 0253-357X(2012)03-0199-06 胚胎的冻融技术极大地拓展了辅助生殖技术在 1 材料与方法 临床中的应用, 它不仅可以保存大量的胚胎, 也提高 了IVF-ET 的累积妊娠率。但是, 由于胚胎着床前遗 1.1 实验研究 传学诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD)活 1.1.1 废弃囊胚的收集和分组 收集本中心PGD为 检会导致胚胎透明带出现孔洞, 因而PGD 的胚胎经 染色体异常的废弃胚胎, 且经培养后其囊胚形态按 过冻融后存活率明显降低[1] 。目前, 冻融技术在 Garder 评分均需在3BB 以上者纳入本实验研究中。 PGD 领域尚未广泛应用。我中心针对 PGD 后的囊 将纳入的囊胚随机分组, 分别采用程序化冻融方法 胚冻融技术进行了实验研究, 并将该技术应用于临 和玻璃化冻融方法进行冻融。 床, 现报道如下。 1.1.2 程序化冻融方法 采用COOK公司慢速冻融 试剂盒, 操作按试剂盒要求进行。冷冻保存时, 囊 胚依次在 3 种冻存液中停留 10 min, 然后装入冻贮 本研究获得国家自然基金资助, 项目号: H0426 通讯作者: 刘平; Tel: +86-10 麦管, 置入冷冻仪, 进入冷冻程序, -150℃时进入液 E-mail: pingliu7703@ 氮保存。解