质谱应用-文献摘要.ppt

非靶向性代谢组学中基于质谱的代谢物鉴定 Mass appeal: metabolite identification in mass spectrometry-focused untargeted metabolomics 应用于代谢组学研究的三种实验策略： 靶标分析（targeted analysis） 半靶标分析（semi-targeted analysis） 非靶标分析（untargeted analysis） 非靶标分析的特点 实验平台 气质联用（GC-MS or GC×GC-MS） 液质联用（LC-MS or HPLC-MS） 毛细管电色谱质谱联用（CE-MS） 质谱-质谱联用（MS×MS） 质谱所能提供的信息 质合比（m/z） 同位素的相对丰度(RIAs) 破碎方式 可以与标准谱对照的质谱图 研究过程中的挑战 哺乳动物代谢很容易被干扰 代谢物数据库不完整 代谢产物物理化学性质的多样化 代谢物鉴定的要求 metabolites of different nominal mass metabolites with the same nominal mass but different molecular formula and monoisotopic mass metabolites with the same nominal and monoisotopic masses, but different chemical structures (including chi-rality and isomerism） 此外，同一种代谢物质衍生后可能会有多种物质被检出，需要把它们还原为原物质 基于GC-MS or GC×GC-MS平台 通常使用70eV电子轰击电离源（EI）；高可重现性、丰富的结构信息、标准谱图。 以保留时间/保留值（RT/retention index）及质谱图作为鉴定依据 有时难以得到分子离子（无法得知分子量）；但使用化学电离（CI）的方式容易得到分子离子 有时结构相近的两种代谢物具有相似的质谱图，如果需要进一步鉴别，可以借助核磁。 很多不在质谱数据库中的代谢物未得到鉴别 引入mass spectral tags (MSTs)的概念，收录代谢物的质谱图和色谱保留值 基于LC-MS平台 确定分子式 1、质荷比——数据库——可能的分子式 （质荷比越精确，可能的分子式的数目越少） 2、同位素相对丰度确定原子个数（也可用同位素标记） 3、含盐溶液中的离子可能和碎片离子结合从而影响分子式的确定，预处理（脱盐）可以一定程度上消除此类影响，但可能造成代谢物的丢失 4、利用峰对验证(e.g.[M+Na+]–[M+H+]) 5、结合其他的生物和化学信息 结合其他生物、化学信息 利用代谢物之间的相互转化关系 利用同位素的丰度剔除不可能的分子式（文中提供了可供参考的文献，但是没有具体的方法） 同位素示踪(通过同位素的标记，可以将所要研究的离子从背景离子中区分出来) 此外，有关基于液相色谱保留时间的数据库完整程度不及气相，所以RT的作用有限。 质谱-质谱联用 将多个质谱串联，目的是有效鉴别具有相近结构的代谢物 常用平台：撞击诱导解离（CID）-离子阱（IT）质谱，四极杆-飞行时间质谱（Q-TOF）,三级四级杆质谱（QQQ），高能诱解离(HCD) - Orbitrap质谱 不同的解离方式会形成不同的质谱图 质谱-质谱联用 * * 靶标与半靶标分析 非靶标分析 化学组成和结构已知 化学组成和结构未知 有成熟的准确、精密、高选择性的研究方法 需要探索适合的实验方法 有选择的研究部分代谢物 基于全部代谢物 验证假设的实验（确定代谢物是否存在或定量） 产生假说的实验（发现新的代谢物） 在一个代谢样品中鉴定一 种成分，需要区别出： . No clear difference is observed in the EI mass spectra for scyllo-inositol and myo-inositol and chromato-graphic separation is required to provide differentiation * * *