酶催化反应动力学 (生物化学).pptVIP

Chapter 9 Enzyme kinetics 第一节 底物浓度对酶促反应速率的影响 第二节 pH对酶反应速率的影响 第三节 温度对酶反应速率的影响 第四节 酶浓度对酶反应速率的影响 第五节 激活剂对酶反应速率的影响 第六节 酶的抑制剂 （3）kcat/Km的意义：在生理条件下，大多数酶并不被底物所饱和，在体内[S]/Km的比值通常介于0.01-1.0之间。 Vmax=kcat[ET] 当[S]Km时， [E]=[ET] v?(kcat/Km) · [E][S] kcat/Km= k1·k3/ (k2+k3) 上限为k1 kcat/Km表示酶的催化效率。 抑制程度的表示方法：一般用反应速率的变化来表示。不加抑制剂时的反应速率为v0，加入抑制剂后的反应速率为vi，则表示： （1）相对活力分数（残余活力分数）： a = vi / v0 （2）相对活力百分数（残余活力百分数）： a % = vi / v0 ×100% （3）抑制分数：指被抑制而失去活力的分数 i = 1—a = 1—vi / v0 （4）抑制百分数(抑制率)： i % = （1—a）×% = （1—vi / v0）×% 有机小分子： 一些还原剂，如抗坏血酸、半胱氨酸，使含-SH的酶处于还原态 金属螯合剂，如EDTA(乙二胺四乙酸)，可络合一些重金属杂质，解除它们对酶的抑制，从而使酶活升高。 抑制作用：有些物质与酶结合后，引起酶的活性中心或必需基团的化学性质发生改变，从而使酶活力降低或丧失。 第六节 酶的抑制剂 抑制作用： 失活作用：凡可使酶蛋白变性而引起酶活力丧失的作用。 抑制作用：凡使酶活力下降，但并不引起酶蛋白变性的作用。 抑制剂：能引起对酶的抑制作用的物质。 可逆抑制作用 不可逆抑制作用 二类抑制用途的鉴别？ 可逆抑制作用可分为三种类型： 1. 竞争性抑制作用 2. 非竞争性抑制作用 3. 反竞争性抑制作用 ? 酶与抑制剂非共价地可逆结合，当用透析或超滤等方法除去抑制剂后酶的活性可以恢复，这种抑制作用叫可逆抑制作用。 (一）可逆抑制作用 某些抑制剂的化学结构与底物相似，与底物竞争酶的活性中心并与之结合，从而减少了酶与底物的结合，因而降低酶反应速度。这种作用称为竞争性抑制作用。 1. 竞争性抑制作用 例如，丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 这种抑制作用可通过增加底物浓度而使整个反应平衡向生成产物的方向移动，因而能削弱或解除这种抑制作用。? 琥珀酸 延胡索酸 丙二酸 Linewevery-Burk图 米氏方程 Lineweaver-Burk plot of competitive inhibition 竞争性抑制中， Vmax不变，Km增大 可通过增加底物浓度而使整个反应平衡向生成产物的方向移动，因而能削弱或解除这种抑制作用。 某些抑制剂结合在酶活性中心以外的部位，因而与底物和酶的结合无竞争，即底物与酶结合后还能与抑制剂结合，同样抑制剂与酶结合后还能与底物结合。但酶分子上有了抑制剂后其催化功能基团的性质发生改变，从而降低了酶活性。这种作用称为非竞争性抑制作用。 2. 非竞争性抑制作用 这种抑制作用不能用增加底物浓度的方法来消除。 非竞争性抑制剂，例如：金属络合剂，如:EDTA、F -、CN -、N3- 等，可以络合金属酶中的金属离子，从而抑制酶的活性。 Noncompetitive inhibition Linewevery-Burk图 * 第一节 底物浓度对酶促反应速率的影响 （1）当底物浓度小时，酶未被底物饱和，反应速率取快于底物浓度，为一级反应； （2）底物浓度变大，ES生成较多，反应速率取快于ES的浓度，为混合级反应； （3）当底物浓度相当高时，酶全部被底物饱和，反应速度不会因底物浓度增加而提高，反应为0级。 为了要解释这一现象， 1903年由Henri和Wurtz提出了中间络合物学说：当酶催化某一化学反应时，酶首先与底物结合生成中间复合物（ES），然后生成产物（P），并释放出酶： 一．中间络合物学说： Michaelis Menten推导米氏方程。 二．酶促反应的动力学方程式 1. 米氏方程的推导 V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] Ks Ks为ES的解离常数（Ks=k2/k1） 二．酶促反应的动力学方程式 [E]?酶总量；[Et]?反应后t时的酶量； [ES]?中间产物浓度 [Et ] ? [