马尾松毛虫核型多角体病毒包涵体的表面增强拉曼光谱研究.PDFVIP

维普资讯 神参器 7 ∈2 28 生物物理学报 第十卷 第四期 1994年 l2月 ACTA B 0『P| ICA S盯 (A vd．10 NoA Dec．1994 马尾松毛虫核型多角体病毒包涵体 的 表面增强拉曼光谱研究 ． 塑垦 鲍培谛 伍铁桥 (四川太学 成都 61OO64) 摘 要 获得 了马尾松毛虫核型多角体病毒 (DpNPV)包涵体在 A啦 中的 SERS谱 包涵体是 通过膜蛋白的COO一和NH2基 团吸附在Ag表面上，Tip和Phe残基侧链接近 Ag表面，Tyr戎基 侧链远离Ag表面，SERS谱 中没出现 AmideI和 AmideⅢ带。强的低波教谱带 (23gzm。。)的出 现表 明包涵体与 Ag表面发生 了明 关键词：毒 显兰的化兰学竺吸兰附。墨型兰鱼查瘟乏 引 言 马尾松毛虫核型多角体病毒 (De~dmllmuspunc眦usNuclearPolyhedrosisvh1】s)简称 DpNPV是我国中山大学生物系昆虫专业首次分离得到的口)，它是危害树木的一种 昆虫病毒， 近年来用病毒制度杀虫剂是减少化学农药对环境污染 的有效方法，所 以对昆虫病毒进行研究 确有实际意义。由于对生物大分子难 以得到质量 尚好 的常规拉曼谱，而表面增强拉曼散 射 (SERS1谱既可抑制荧光背景又能使弱的拉曼信号得 以几个数量级 的增强，所 以近年来用 SERS谱研究生物大分子异常活跃 目前国内外还未见到有关DpNPV的SERS谱的报导， 本文获得了具有明显增强效果的 DpNPV包涵体的SERS谱，并对其结果进行了讨论 和分 析 ／ 实 验 DpNPV包7涵／体的提取：将收集的 DpNPV幼虫尸体 (由四川省农科 院提供) 充分研 磨 ，加水过滤 ，滤液 以 1500r~／Kn和 4500r加曲交替差速离心 5—7次 ，再经蔗糖密度梯度 离心 40分钟 ，在 45—50％带上获得 的乳 白悬液，再经 6OOO r／n~n离心，获得灰 白色沉淀 ， 即得相 当纯度 的包涵体，加入适 当的二次蒸馏水得到浓 的包 涵体悬液 包涵体浓 度约 100rng／In1。 Ag胶的制备：详见文献_21。 实验 时将 DpNPV包涵体悬液滴入 Ag胶 中。约 10分钟胶体溶液 的颜色 由淡 黄变成暗 黄。用Na0H和HN0 稀溶液加入含包涵体的Ag胶 中调整其 pH值 。吸附物浓度约 1mg／ml 拉曼光谱实验：拉曼光谱的实验装置是采用美国sPEx14o3型双光栅拉曼光谱仪，激光 光源为美国光谱物理公司2020型氩离子激光器，激光激发波 长为 514．5rim,激光功率 为 国家 自然科学基盘贷助项 目 ¨通讯地址 四川大学分析测试 中 维普资讯 生 物 物 理 学 报 1994妊 200roW，光谱带通为 l(krn ，采用 90。散射配置收集拉曼散射光，用RCA31034光 电倍增管 进行探测 实验温度为 18 。C。 结果和讨论 DpNPV包涵体的常规拉曼谱如图1所示，其谱带的指定 列人表 1 中，拉曼谱虽不 存