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Company Logo Company Logo LOGO 白念珠菌支气管肺感染对大鼠肺TLR2表达和IL-10水平的影响 硕士研究生：林莉 导 师：王莉 Toll样受体（Toll like receptors,TLRs）是新近发现的同源于果蝇Toll的蛋白分子，属于Ⅰ型跨膜蛋白受体，TLRs能对病原体识别、结合、引发一系列信号间的传导，促进各种炎症介质的释放。 立题依据: Toll样受体 立题依据： TLR2识别暴露细胞壁表面的成分甘露聚糖等病原体相关分子模式后，可通过跨膜结构将白念珠菌壁上的甘露聚糖等分子的刺激信号转导入细胞内，通过胞内段Toll/IL-1R(TIR)以髓样分化因子88(MyD88)依赖和非依赖途径分别激活NF-κB和丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）级联反应通路激活天然免疫系统，引发前炎症因子的释放，介导急性期反应，直接杀伤病原微生物。引发获得性免疫反应的激活。 大量体外研究认为念珠菌感染后能使免疫细胞表面表达的TLR2水平上升。研究也证实LPS能使大鼠体内TLR2表达水平增高。但白念珠菌感染后大鼠体内肺TLR2表达的情况还鲜有报道。 立题依据： 立题依据： Netea等认为TLR2能通过Treg表达的升高，介导Th2水平增高，抑制炎症反应。 立题依据： Fitzgerald等认为TLR2能介导抗感染的炎症反应，导致IL-10的降低。 立题依据： 而Roger等发现在感染的早期虽然Treg细胞的数量增多而功能却受到抑制，导致效应T细胞的大量激活，通过呼吸爆发等作用大量杀灭病原体，而在后期当白念珠菌的水平下降到一定水平后Treg的活性恢复，避免过度炎症损害机体。 通过研究肺部白念珠菌感染后不同时间（3天、7天）肺组织TLR2的表达，Th2分泌细胞因子（IL-10）的水平，及感染程度。探讨白念珠菌感染对TLR2的表达水平和肺组织匀浆上清液中IL-10水平的影响，以及它们在肺部白念珠菌感染中的发病机制中的作用。 研究目标： 1.肺部白念珠菌的感染情况（PAS法） 2.观察感染后不同时间大鼠肺组织炎症变化 （HE染色 ） 3.肺部白念珠菌感染后3天、7天大鼠肺组织中TLR2的表达（免疫组化法） 4.肺组织匀浆上清液IL-10水平（ELISA法) 研究内容： 技术路线： 36只SD大鼠 3天组 7天组 3天组 7天组 3天组 7天组 3天杀鼠 免疫功能低下对照组 生理盐水对照组 感染组 7天杀鼠 取肺组织 固定，包埋，制成切片 固定，包埋，制成切片 冻存，匀浆，离心 HE染色 PAS染色 免疫组化 ELISA 统计分析 得出结论 免疫功能低下动物模型建立【1，2】： 实验动物常规饲养两周后，第1，3，5，7，9，11，13天给予免疫低下组和感染组大鼠皮下注射醋酸氢化可的松，每次80 mg/kg,成功建立免疫功能低下模型；正常组于相同时间给予同等剂量的生理盐水皮下注射。 【1】 马壮 钱桂生 黄桂君，等。免疫功能低下Wistar大鼠白念珠菌肺炎模型的建立［ J ］. 中华微生物学和免疫学杂志，2001，21（5）：569-573. 【2】 Lewis RE ， Lund BC ， Klepser ME ， et al. Assessment of antifungal activities of fluconazole and amphotericin B administered alone and incombination against Candida albicans by using a dynamic in vitro mycotic infection model ［J］ .Antimicrobial Agents and Chemotherapy ， 1998 ， 42 （ 6 ）： 1382-1386 关键步骤： 感染动物模型的建立 【1，2】 动物免疫功能低下建立后的第14天，用4%水合氯醛（0.3 ml/100g）腹腔注射麻醉动物，麻醉成功后，感染组经气管插管注射白色念珠菌混悬液0.2ml /只，正常组及免疫功能低下组经气管插管注射同等剂量的生理盐水。 【1】 马壮 钱桂生 黄桂君，等。免疫功能低下Wistar大鼠白念珠菌肺炎模型的建立［ J ］. 中华微生物学和免疫学杂志，2001，21（5）：569-573 【2】 Lewis RE ， Lund BC ， Klepser ME ， et al. A