大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养生长和成肌特性.PDF

上 海 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) ( ) 7·75 · Vo l. 28 N o. 7 Ju l. 2008 Journal of Shanghai J iaotong U n iversity M edical Science 文章编号 : 　0258 - 5898 (2008) 07 - 0775 - 04 ·论 　著 · 大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养生长和成肌特性 徐 　可 , 　方祖军, 　李映川, 　郑 　捷 , 　丁 　强 (复旦大学 　华山医院泌尿外科 , 上海 　200040) 摘 　要 : 目的 建立大鼠骨骼肌卫星细胞分离和纯化方法 ,并观察骨骼肌卫星细胞的体外增殖和成肌特性 。方法 采用改良两 步酶消化法结合差速贴壁技术 ,获得高纯度的骨骼肌卫星细胞 。免疫组化染色鉴定体外培养的骨骼肌卫星细胞 ;M TT法检测体 外培养骨骼肌卫星细胞的生长情况 ;倒置显微镜观察不同培养条件下骨骼肌卫星细胞的分化特性 。结果 获取的骨骼肌卫星细 胞纯度高 ,细胞中肌源性标志中间丝蛋白 de sm in呈强阳性表达 。体外培养时 ,骨骼肌卫星细胞有 1～2 d 的潜伏期 , 5 ～6 d进入 平台期 。细胞汇合至 60%～70%或降低培养基血清浓度时 ,开始相互融合形成肌管细胞 。结论 酶两步消化法和差速贴壁技术 是一种简便易行 、获得较高纯度的骨骼肌卫星细胞的方法 。骨骼肌卫星细胞体外培养时无需特殊诱导即可相互融合 ,形成具有 骨骼肌收缩特性的肌管细胞 。 关键词 : 骨骼肌卫星细胞 ; 　培养 ; 　增殖 ; 　分化 中图分类号 : Q 813. 11　　　　文献标志码 : A Character istics of prolifera tion and m yotube cell form a tion of ra t skeleta l m u scle sa tellite cells cultured in vitro XU Ke, FAN G Zujun , L I Yingchuan , ZHEN G J ie, D IN G Q iang (D ep a rtm en t of U rology, H uashan H osp ita l, F udan Un ivers ity, S hangha i　200040, Ch ina) Ab stract: 　O bjective　To e stab lish a m ethod of isolation and pu rification of rat skeletal mu scle satellite cells, and ob serve the characteristic s of p roliferation and myotube cell form ation of skeletal mu scle satellite cells cu ltured in vitro. 　M eth ods Purified skeletal mu scle satellite cells were ob tained by imp roved twostep enzym atic digestion m ethod and p rep lating techn ique. Immunoh istochem ical stain ing wa s emp loyed to identify the skeletal mu scle satellite cells cu ltured in vitro. The grow th of skeletal mu scle satellite cells cu ltured in vitro was exam ined by M TT assay. The differentiation of skeletal mu scle sate