天然产物分离纯化专题.PDF

emuch原创作品 天然产物研究室 天然产物分离纯化专题 作者：suger_Fan 2006-12-4 第一部分 天然产物的分离纯化的常用技术 一、柱层析技术 1.柱层析的原理：柱层析就是利用不同物质在洗 脱剂中的展开速度不同（跑的快慢程度）而进行 分离。 天然产物的分离中最常用的就是以硅胶、氧化铝 两种物质为填充剂的色谱柱，常称为：硅胶柱和 氧化铝柱。这里重点介绍便宜且天然产物分离过 程中应用最为广泛的硅胶柱。 2006-12-4 图1.柱色谱装置 2006-12-4 2.层析柱的选择 2.1 柱径的选择，就是确定选用哪种直径的柱子进行柱层析操 作。通常实验室采用直径在0.5～10cm的柱子，柱高50～70cm。柱子 径高比一般在1：5～10 。 样品量 0.8g 0.8～2.5g 2.5～5g 5g 柱径 2.0cm 2.5cm 3.5、4cm 6cm 原因：柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上 就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试 想如果柱子十厘米，而样品就有2厘米，那么分离的难度 可想而知，这种情况只有要先用很低极性的溶剂（比如正 己烷等，很贵！）慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘 米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。 2006-12-4 2.2 柱长的选择 理论上讲柱子越长越好，柱子长了，相应的理论 塔板数就高。柱效自然就高。对于不易于分开的 组 分最好采用长一些的柱子。 总之：层析柱的选择是应该是粗且长的柱子最好 （当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶 剂，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什 么了）。 2006-12-4 3.填料的选择 常用填料：硅胶和氧化铝 一般实验室内都采用硅胶。 硅胶用量：为待分离样品量的30～40倍，当然，具体的选择要具体分 析。如果所需组分和杂质分的比较开（所需组分的Rf介于0.2～0.3， 与杂质的Rf值相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200 毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果待分离组分与杂质之间Rf相 差不到0.1，就要加大加长柱子，另外还需要相应的减小洗脱剂的极性 等等 装柱材料：尽量选用粒径均一的产品，这样装出的色谱柱柱效最好。 若填料粒径分布极不均匀，应先过筛，常压柱最常使用的为100～200 目的填料。 2006-12-4 4.加压，常压与减压柱 加压柱：可以增加洗脱剂的流动速度，减少产品 收集的时间，但是会减低层析柱的理论塔板数。 一定程度上降低了组分的分离效果。 常压柱：在其他条件相同的时候，常压过柱的柱 效最高，但是耗时也最长。（例如对于有些难于 分离的天然化合物的分离过柱，过一次柱子耗时 几个星期也是有的。） 2006-12-4 减压柱：能够减少硅胶的使用量 （能够节省一半甚至更多），但是由