天然高分子材料壳聚糖固定化纤维素酶的研究-河北师范大学学报.PDF

( ) 第 28 卷 第 4 期 河北师范大学学报 自然科学版 Vol . 28 No . 4 2004 年 　7 月 Journal of Hebei Normal University (Natural Science Edition) J ul . 2004 天然高分子材料壳聚糖固定化纤维素酶的研究 杨国营 , 　郝振芳 , 　秦 　玫 , 　赵惠敏 (河北师范大学 化学学院 ,河北 石家庄 　0500 16) 摘 　要 :使用双功能试剂戊二醛作交联剂 ,将纤维素酶固定于脱酰度 93 . 66 %的壳聚糖上 ,探讨了交联剂 的浓度 、给酶量等固定化条件 ,研究了固定化酶的热稳定性 、米氏常数 、最适温度及最适 p H 值等理化性质. 实 验发现 :脱乙酰度高的壳聚糖所用戊二醛的质量浓度较高 ,且固定化酶量较高 ; 固定化酶的热稳定性比原酶 高 ,与底物亲和力增加 ;最适 p H 值向酸性方向移动. 关键词 :壳聚糖 ; 戊二醛 ; 纤维素酶 ; 固定化 中图分类号 :O 636 . 1+ 1 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2004) 近年来 ,壳聚糖作为固定化酶载体的研究引起了不少学者的重视[ 1～3 ] . 壳聚糖在蟹 、虾壳中与蛋白 质及无机钙盐交织成网状结构[2 ] , 在除去蛋白质及无机盐后得到几丁质 ( α 乙酰氨基 β 1 ,4 葡聚 ) α β 糖 . 壳聚糖为几丁质的脱乙酰化产物 ,学名为 氨基 1 ,4 葡聚糖. 壳聚糖具有 良好的机械性能、 稳定的化学性质和较高的热稳定性 ,其分子中的氨基使之具有许多独特性质. 它来源丰富 ,易于制备 ,是 目前固定化酶良好的载体[3 ] . 据文献[ 1]报道 ,壳聚糖可先后与戊二醛 、酶发生 Schiff 反应 ,戊二醛作为双功能试剂 ,2 个醛基分 别与壳聚糖和酶上的氨基结合 ,因此壳聚糖的脱乙酰度直接影响到交联剂戊二醛的质量浓度及给酶量. 陈盛等[4 ] 对脱乙酰度为 60 %的壳聚糖固定化纤维素酶的固定化条件进行了探讨. 本文中 ,笔者采用脱 乙酰度为 93 . 66 %的壳聚糖作载体 ,对固定化最适条件 、热稳定性 、最适p H 值 、最适反应温度 、表观米氏 常数等理化性质进行了探讨. 1 　实验部分 1. 1 　药品及仪器 ( ) ( ) 壳聚糖 ,脱乙酰度 93 . 66 % 日本甲洋株式会社 ;戊二醛 ,生化试剂 ,按 50 %计 天津市医药公司 ; ( ) ( ) 羧甲基纤维素钠盐 ,实验试剂 上海赛珞璐厂出品 ;纤维素酶 获鹿胜利酶制剂厂出品 . ( ) ( ) ( 72 1 型分光光度计 上海第 3 仪器厂 ;80 1 型医用离心沉淀器 上海手术器械厂 ;超级恒温器 辽 ) ( ) 阳市恒温仪器厂 ;78HW 1 型恒温磁力搅拌器 杭州仪器电机厂 . 1. 2 　实验方法 1. 2 . 1 　酶液制备及活力测定 ( ) 酶活力 u