葡萄霜霉菌基因组DNA不同提取方法的比较.pdfVIP

葡萄霜霉菌基因组DNA不同提取 方法的比较※ 尹玲 ，张雅丽，卢江 (中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083) 摘 要：为了从微量的葡萄霜霉菌样品中得到适合微卫星标记 (SSR)实验所需基因组DNA，本文分 析了4种不同的真菌DNA提取方法对霜霉菌样品的提取效果。结果发现，改良的CTAB法提取的基因组DNA 得率最高；FungalDNAoutKit法提取的DNA纯度最高；尿素法所用时间最短；蜗牛酶法所用时间最长。由 于可用于提取DNA的霜霉菌样品极其有限，加之SSR实验对DNA质量要求不是很高，所 以综合考虑得率、 纯度、提取时间、经济成本以及PCR结果等因素认为，要从微量的葡萄霜霉茵样品中得到适合微卫星标记 (SSR)实验所需基因组DNA，改 良的CTAB法是较理想的提取方法。 关键词：葡萄霜霉菌；基因组DNA；微卫星 中图分类号：$463．631．1+9 文献标识码：A ComparisionofdifferentDNAextractionmethodsforPlasmoparaviticola※ YinLing，ZhangYali，LuJiang (CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering，ChinaAgricultureUniversity,Beijing100083) Abstract：Toobtainthegenomi~DNA usedforM icrosatellitemolecularma~erdevelopmentfrom asmallquantityof Plasmoparaviticolasamples．fourdifferentfungalDNAextractionmethodswereanalysedinthissutdy．ItisfoundthatgenomieDNA canbeextractedwiththehighestyieldbyimprovedCTABmethod，withthebestpuriytbyFungalDNAoutKit，withhtelestandmost timebyureamethodandsnailenzymemehtodrespectively．However,ofrthereasonsoflimitedsamplesandlowqualiytrequirements ofDNAinSSR experiment，ourresultsshowedthatimprovedCTABmethodwasthebestwaytoexrtactgenomicDNAusedforSSR analysisfrom tracesampleofP viticolathroughcomparisionoftheirtimeconsumed，DNApurltyandyield，economiccostnadPCR results． Keywords：Plasmoparaviticola；genomicDNA；Microsatellite(SSR) 葡萄霜霉病是危害葡萄的 Toni]，是葡萄霜霉病的病原菌， 生菌 ，而且至今不能像疫霉病 一 种世界性的古老真菌病害…， 雌雄异株 ，属于鞭毛菌亚门、 菌、炭疽病菌等真菌那样可以在 严重影响葡萄植株生长及果实 卵菌纲、霜霉菌 目、单轴霉属， 人工培养基上培养和保存，这样 产量。葡萄霜霉菌 [Plasmopara 是一种专性寄生菌。 极大地限制了霜霉菌的样本采集 vidcola(BerketCurt．)Ber1．etde 由于 vidco~是一种专性寄 量，而研究它遗传方面的信息， 收稿 日期 ：2009-l1—27 基金项 目：农业部948x．~目 (2006一G26) 通讯作者 ：卢江，教授。E—mail：j．1u．cau@gmail．com 4 2010．03 需针对单个霜霉菌克隆，对其基 上清，沉淀用70％的乙醇洗涤， 淀用0．6mL缓冲液Ⅲ (1Ommol／L 因组DNA进行分析。为了从微量 室温 干燥后溶 于20 “L双蒸水 Tris—HCI+ImmolEDTA)溶解 ，