免疫实验技术课件.ppt

免疫学实验技术 浙江大学医学院 利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分子等)及免疫细胞的实验过程。 有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判断 。 一、 凝集反应 颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无关载体上的可溶性抗原与相应抗体，在适量电解质的存在下，形成肉眼可见的凝集团块。 1、直接凝集反应 （1）玻片凝集试验 ABO血型鉴定 （2）试管凝集试验 肥达试验 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应现象的最高稀释度作为待检抗原（或抗体）的含量。 凝集反应（agglutination) 颗粒型抗原 细菌、细胞 ＋ 抗体 （凝集素） 电解质 （生理盐水） ＋ 37℃～50℃数小时 凝集反应（凝集成团） 1. 直接凝集试验 玻片法 试管法 含有已知抗体 的诊断血清 待检菌液 生理盐水 特点 简便、快速 不能定量 UUUU 待检血清 盐水 简便、快速 能定量 肥达氏试验（widal test) 伤寒、副伤寒 已知抗原 2、间接凝集反应 指可溶性抗原(或抗体)吸附在乳胶颗粒或红细胞等载体表面与相应抗体(或抗原)结合反应，在适宜的条件下，出现凝集现象。 正向间接凝集反应 用可溶性抗原包被载体以检测抗体。 反向间接凝集反应 用抗体包被载体以检测抗原。 二、沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合，当两者比例合适，并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线。 沉淀试验（precipitation test） 可溶性抗原 细胞裂解液 ＋ 抗体 （沉淀素） 电解质 （生理盐水） ＋ 37℃～50℃数小时 沉淀反应（清澄液中出现混浊沉淀） 沉淀反应分类 （1）琼脂扩散试验 a.单向琼脂扩散试验 b.双向琼脂扩散试验 （2）免疫电泳试验 对流免疫电泳：原理：在阴极孔内加抗原，阳极孔内加抗体。通电后，抗原带负电荷较多，分子较小，向阳极泳动；抗体分子带负电荷较少，加上分子量大，在琼脂的电渗作用下向阴极泳动。 （3）环状沉淀试验 （1）单向扩散试验 （Single redial diffusion test） 预先混有抗体 （2）双向扩散试验 （Double diffusion test） （3）对流免疫电泳 作用及特点： 抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，当两者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。 检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩散法高约10倍，只需1～2小时即可获得检验结果。 不能定量测定。 Ag Ab _ + 三、 免疫标记技术 原理： 利用酶、荧光素、胶体金、发光物质以及放射性核素等标记物来标记抗原或抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最后测定复合物中的标记物。 优点：特异、敏感、快速，可作定性、定量或定位测定。 依据检测物分两类： 1.免疫组化技术(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位； 2.免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原或抗体的检测。 依据标记物的不同，可分为： 酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术和放射免疫技术。 1、酶免疫技术 酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原进行抗原抗体反应。 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 属固相酶免疫测定 ELISA原理： 把待测标本(含有未知抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的顺序与固相抗原或抗体起反应，再洗涤固相载体，随后加入酶的底物，底物受酶催化转变为有色产物。根据颜色的深浅对待测物质定性或定量。