ELISA法检测配合饲料中黄曲霉素B1前处理方法的改进研究.pdf

中国饲料 2010年第9期 ELISA法检测配合饲料 中 黄 曲霉素 B1前处理方法的改进研究 成都市产品质量监督检验院 周 浩 王利娜 李俊霞 肖全伟 刘 英 摘【要】用酶联免疫吸附测定法(ELISA)法检测配合饲料 中黄 曲霉毒素 B (AFB)的含量 ，关键在于样品的前处 理 。本文对配合饲料 中AFB，的前处理作 了方法改进 。结果表 明：改进后 的前处理方法较 国标方法能显著地提高 AFBI的检 出量 ，与高效液相色谱法(HPLC)法数据一致 ，且改进方法加标回收理想，平均回收率为87．3％～94．5％。 [关键词1酶联免疫吸附测定法；配合饲料 ；黄 曲霉毒素B；前处理 ；方法改进 【中圈分类号】$816．17 文【献标识码】A [文章编号】1004-3314(2010)09-0040-02 fAbstract]Thekeytothedeterminationof胡atoxinB】(AFBj)in也efomrulafeedbyenzymelinkedimmunoserl：lent assayfELISA)issamplepretreatment．Theevaluationofmethodwasstudiedinthispaperaccordingtothepretreatmentof theformulafeed．Resultsshowedhtattheimprovingmethodcouldimproveevidentlyhtedetemr inationdataofAFB1，hte dataofELISAwasequaltohighperfomranceliquidchromatography (HPLC)，andhteAFBlrecoveryof theimproving methodwasgood．theaveragerecoveryratewas87．3％ 一94．5％． K【eywords】ELISA；fomrulafeed；aflatoxinBl；pretreatment；improvement 黄 曲霉毒素 B (AFB)具有极强 的致癌性和 联免疫定量测试盒 (江苏省苏微微生物研究所有 致突变性。动物采食了被 AFB。污染的饲料后，可 限公司)。 引起急性病变死亡 ，还可 以在体 内蓄积或者经新 1．2 设备 酶标仪 (奥地利 Sunrise—basic)；恒温 陈代谢转化成其他有毒物质在体 内分布(居乃琥， 生化培养箱 (日本三洋 MIR一253)；高效液相色谱 1980)。人若食用了这些受 AFB 污染的动物组 仪(戴安Ultimate3000)。 织，健康将遭受严重威胁，因此饲料中的AFB检 1-3 样品来源 本实验所用配合饲料样品均从 测受到高度重视。AFB 易溶于甲醇、氯仿和乙腈 成都地区饲料生产厂 (公司)购买，共计 20组 ，另 等有机溶剂 ，难溶于水和石油醚 (陈炳卿 ，2000)。 外实验 带有 FAPAS (FoodAnalysisPerformance 由于配合饲料 中组成成分复杂 ，且添加 了一定的 AssessmentScheme)动物饲料样品。 营养强化剂以及重金属离子(赵春城等，2003)，使 2 实验方法 得样品的前处理困难 ．提取过程中易出现干扰 、乳 2．1 样品的提取 化现象，导致不彻底提取。针对前处理过程中易出 2．1．1 国标方法 按照国标 GB／T17480—2008提 现的干扰。本文作了方法的改进研究。 取方法 ：称取 5g(精确至 O．01g)试样置于 100mL 1 材料 具塞三角瓶中．加入甲醇水溶液 25mL，加塞振摇 1．1 主要试剂 甲醇水溶液 ：量取 50mL甲醇， 10min，过滤 ，弃去 1／4初滤液后收集滤液。准确 加 50mL水 ；乙腈水溶液