稳定过表达生长分化因子5基因大鼠脂肪干细胞系地建立.PDFVIP

中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 ， ， ， ２０１７ ４ ２４ ２ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１７Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．２ １８１ 　 　 　 　 　　 ： ／ ·论 著· 　　 ＤＯＩ１０．１２０２５．ｉｓｓｎ．１００８６３５８．２０１７ ｊ 稳定过表达生长分化因子 基因大鼠脂肪干细胞系的建立 ５ 王会仁，曹 露，江立波，林 红，李熙雷，董 健 　 　 　 复旦大学附属中山医院骨科，上海 ２０００３２ 　 ［摘要］ 目的：探讨慢病毒介导的稳定过表达生长分化因子 （ ）基因大鼠脂肪干细胞（ ）的构建条件和方法。 ５ＧＤＦ５ ＡＳＣｓ 　　 　 方法：取大鼠腹股沟脂肪垫组织，采用 型胶原酶消化贴壁法分离培养大鼠 。倒置相差显微镜观察细胞形态， 法 Ⅰ ＡＳＣｓ ＣＣＫ８ 测定细胞生长曲线，流式细胞仪鉴定细胞表型。制备带 ／ 融合基因的慢病毒载体系统，探索不同感染复数（ ＧＤＦ５ＧＦＰ ＭＯＩ＝ 、、 、 、 、 、 、 ）的转染效率，选择最佳 ，采用流式细胞仪检测转染效率。对转染细胞行流式细胞筛选，测定筛 １５１０２０４０６０８０１００ ＭＯＩ 选后转染细胞的阳性率。筛选出的细胞行细胞爬片， 染色，形态学上进一步验证细胞阳性率；并采用 法检测转染 ＤＡＰＩ ＣＣＫ８ 后细胞活力。结果：成功培养大鼠 ，流式细胞免疫表型鉴定：间充质干细胞表面抗原（ 、 、 、 ）表达阳 ＡＳＣｓ ＣＤ９０ＣＤ２９ＣＤ４４ＣＤ１０５ 性，造血细胞表面抗原（ 、 ）和骨髓干细胞表面抗原（ ）表达阴性。成功构建 过表达慢病毒载体系统，慢 ＣＤ４５ＣＤ３４ ＣＤ１０６ ＧＤＦ５ 病毒转染大鼠 最佳 为 ，转染率为 。采用 荧光流式细胞筛选技术筛选后阳性率可提高至 。 ＡＳＣｓ ＭＯＩ ４０ ６５％ ＧＦＰ ９６％ ＣＣＫ８ 法显示，转染后细胞活力、生长曲线与未转染细胞无明显差异。结论：胶原酶消化法可成功培养大鼠ＡＳＣｓ，流式细胞筛选技术 可显著提高转染细胞阳性率，且对细胞系活力无显著影响。 ［关键词］ 脂肪干细胞；慢病毒；生长分化因子 ；转染 ５ 　　 　 ［中图分类号］ Ｒ３３ ［文献标志码］ Ａ 　　 　 　　　 　 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳狊狋犪犫犾犲犌犇犉