蛋白质及其标记.ppt

O-酰基异脲 异脲 N-羟基硫代琥珀酰亚胺 * * 含 有双砷基团的有机小分子(如 FlAsH-EDT2)，能够穿透细胞膜，与重组目标蛋白末端的四半 胱氨酸序列 CCXXCC 序列（TC-tag，X 为非 Cys 的任意氨基酸）特异结合 FLAsH体系还存在一些缺点。由于联砷与富含半胱氨酸的蛋白质存在非专一性作用，即使使用过量的EDT，也会产生较高的背景荧光；无法做到在同一个细胞器中同时以不同的颜色分别标记两个不同的蛋白质；而且，由于受体上的半胱氨酸必须处于还原态，这样就很难对处于氧化环境的细胞进行标记。 * Ni-NTA 作为理想的FRET 受体几乎完全淬灭了GFP的荧光。 特别要指出的是，Ni-NTA 探针都是通过淬灭与目标蛋白质连接的受体的荧光间接使用的。这是由于对与Ni-NTA 直接相连的荧光基团的荧光成像相当困难，因为Ni2+会淬灭荧光并且Ni-NTA 与寡聚组氨酸序列之间的亲和力并不是特别高。同样是以氨基酸序列作为受体，这种探针优于FlAsH 的地方是它可以用于氧化环境中。 环氧化，双羟化，羟氨化 * * * 偶极化 N-羟基硫代琥珀酰亚胺 * 肼，联氨 hydroxycoumarin 羟香豆素 * 烷基转移酶 * 双砷染料-四半胱氨酸重组噬菌体的构建及 应用 ?Angew. Chem. Int. Ed.,?2011, 50, 5873-5877 其他特殊标记方法