病理学新技术课件.ppt

病理学常用新技术原理及应用 ;病理学的发展离不开病理技术的进步，纵观病理学的发展史，从器官病理学、细胞病理学、超微病理学、免疫病理学、分子病理学、远程病理学及当今的计算机网络信息病理学。每一个发展阶段都有新技术的革命。新技术使我们对疾病认识更加深入切实。从大体、细胞、超微结构、分子基因水平逐步深入，正如病理学前辈们所说：技术是病理学之母。 ;病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术。有人体病理学技术和实验病理学技术，二者相互渗透，互为促进，传统的福尔马林固定、石蜡切片、HE染色是病理学的基本技术，已广泛应用于基础和临床病理学工作。根据科研的发展，临床病理学的需要，又不断产生新的技术。作为当代的医学生，要适应技术的发展进步、了解病理学研究和临床实践中的一些新技术是必不可少的。现介绍一些新技术方法，供同学们在以后的学习工作中参考。 ;第一节 组织与细胞化学检查 ;细胞化学方法能够对细胞内的各种成分进行定性、定位、定量研究，包括悬浮胸腹水细胞、血液细胞以及体外培养细胞均能产生同样良好的效果。目前，用细胞化学技术所能显示的化学成分有蛋白质（显示某些特定蛋白、某些氨基酸或功能基）、核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）、糖类（如糖原、粘多糖和糖脂等）、脂类（如中性脂肪、磷脂和固醇等）、酶（包括水解酶如磷酸酶）、特异抗原（其化学本质可能是多肽、蛋白、糖蛋白等）、无机盐和微量元素（如铁、铜、锌、钻、镁等）。 ;第二节 免疫组织与细胞化学检查 ;一、原理与方法;图 GFAP阳性神经胶质细胞 ;二、免疫组织化学技术的主要步骤与常用标记物 ;（二）常用标记物 1．酶 为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：①底物是特异性的，且易于显示；②酶反应产物稳定，不易扩散；③容易获得纯酶分子且较稳定；④酶标记抗体后，不影响两者的活性；⑤被检组织中不应存在内源性相同的酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）、硷性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。 2．荧光素 指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用的有异硫氰酸荧光素（FITC）、四甲基异硫氰酸罗达明（TRITC）。 3．生物素 其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。 4．金属标记物 如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。 ;三．常用免疫组织化学染色方法 ;（二）间接法 先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异性抗体， 二抗仅有种族特异性。 特点: ⑴ 预先标好二抗，较方便； ⑵ 比直接法敏感，但仍差。 ;（三）PAP法与双PAP法： 既过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法(Perixidase Antiperoxidase Complex Method,PAP) 先将过氧化物酶（HRP）免疫兔/羊/鼠，制成兔/羊/鼠抗ＨＲＰ；然后再与ＨＲＰ结合，形成一个稳定的多角形结构（PAP）。 特点：⑴ 敏感性较高； ⑵ 背景染色低（相对）； ⑶ 双PAP敏感性更高，但背景相对较重。 ;（四）ABC法： 既卵白素－生物素过氧化物酶复合物法(Avidin Biotin-peroxidase Complex,ABC) 利用卵白素与生物素特有的高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素化HRP，再以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成一个复合物；同时先将二抗生物素化。 １．如将卵白素换成链霉亲和素，则为： ＳＡＢＣ法：(StreptAvidin Biotin-peroxidase Complex) ２．将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称： ＬＳＡＢ法：labelled StreptAvidin-Biotin ３．用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为： Ｓ－Ｐ法：(StreptAvidin Peroxidase conjugataed method) 若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称ＳＡＰ法。 若分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称ＤＳ法 特点: ⑴ 敏感性高，（比ＰＡＰ高８～４０倍）； ⑵ 背景淡，链霉亲和素更好； ⑶ 方法较简便，时间较短； ⑷ 应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。 ;四．免疫组织化学染色过程中需注意的有关事项 ;2．假阳性反应： ⑴ 非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等； ⑵ 内源性过氧化物酶：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和某些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、肝等； ⑶ 抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生