蛋白质免疫印迹技术及常见问题课件.pptVIP

免疫印迹技术的基础-免疫反应 免疫测定(immunoassay) 利用抗原抗体 反应来测定标本中抗原或抗体的方法 检测对象：具体免疫活性的物质 反应特性：高度的特异性和敏感性 Western Blot原理简介 Western Blot一般流程 Western Blot常见问题分析 内容概要 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。 Western Blot 原理 目的蛋白的表达特性分析 目的蛋白与其它蛋白的互作 目的蛋白的组织定位 目的蛋白的表达量分析 Western Blot 的应用 Western Blot 流程 蛋白样品的制备 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 转膜 封闭 一抗杂交 二抗杂交 底物显色 通过水溶法或有机溶剂制备总蛋白 水溶液提取法 针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂 。 有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括 乙醇、丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白 蛋白样品的制备 蛋白样品的定量 Bradford法 考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种不同颜色的形式，在一定浓度的乙醇和酸性条件下，可配成淡红色的溶液，与蛋白结合后形