免疫磁珠阴性法富集恶性胸腔积液中肿瘤细胞方法的建立.pdfVIP

·673· 91堡箜垫塑!I垩咝苤!釜!!!!生!旦星!i鲞盟!型坠也』!业竺堕型!i!堕i!，墅l鲨竺!坐!111：∑型：!!，丛生! ．论著． 免疫磁珠阴性法富集恶性胸腔积液中 肿瘤细胞方法的建立 杨俊俊徐兴祥闵凌峰LIN Ping钱桂生 【摘要】 目的建立免疫磁珠阴性法富集恶1眺胸腔积液肿熘细胞的力‘法，探讨该h‘法富集胸腔 积液中肿瘤细胞的敏感性、特辟性及其应用价值?方法 将5、10、20、50、100个4，6一二眯一2笨吲哚 (DAPI)染色的肺腺癌细胞系A549细胞3}+,TJiJDI]入20ml心力衰竭患者的胸腔积液巾[约含(1～10)X 106个细胞]，通过免疫磁珠阴性法富集癌细胞，荧光显微镜检测体外加入痛细胞的同收j棼，收集 2010年7月至2011年7月江苏省另、北人民医院呼吸科53例患者的胸腔积液，其中包括经活柃病理 证实的36例肿瘤患者的胸腔积液标本，男25例，女11例，年龄40～78岁，平均(63±9)岁；17例外肿 瘤患者的胸腔积液标本，男8例，女9例，年龄25～8】岁，平均(53±18)岁?应JtJ免疫磁珠『5爿·降法及 密度梯度离心法富集53份胸腔积液标本并涂片，然后分j；0应_L}J瑞她染色、免疫荧光染色及荧光原位 杂交(FISH)法进行肿瘤细胞鉴定。结果分别JJN入5、10、20、50、100个经DAPI染色的肺腺癌A549 细胞的同收率分别为75％、78％、82％、85％和88％．平均¨收率为81．6％。心州免疫磁珠阴性法联 合瑞姬染色检测恶性胸腔积液中肿瘤细胞的阳性率为8】％(29／36)，免疫磁珠阴性法联合免疫荧光 染色检m表达细胞角蛋白18(CKl8)和DAPIJ；几’降、ILl细胞共同抗原(CD。；)阴性细胞的阳性率均为 100％，免疫磁珠阴性法联合荧光原位杂交(FISH)检_I{{肿瘤细胞的阳性率为86％(31／36)；密度梯度 离心法联合瑞姬染色检m肿瘤细胞的m性率为6l％(22／36)、，免疫磁珠阴性法联合瑞姬染色或 FISH与密度梯度离心法联合瑞姬染色比较，差异均有统计学意义(×2=4．00，P=0．039；x2=5．818， P=0．012)。良性胸腔积液患者应用免疫磁珠阴性法联合瑞姬染色或FISH、密度梯度离心法联合瑞 姬染色均未检卅肿瘤细胞，而应用免疫磁珠阴性法联合免疫荧光染色榆…CKI8及DAPI附}生、CI)。， 阴性细胞的阳性率为100％。结论应用免疫磁珠阴性法富集胸腔枳液肿瘤细胞的方法可jj，目+该方 法联合瑞姬染色或FISH对恶性胸腔积液的诊断具有较高的敏感性和特t”_Z性，埘]二良恶性胸腔积液 的鉴别具有重要意义；m联合CKl8、I)API、CD。，标I己的免疫荧此染色不能有效鉴别胸腔积液一t，的肿 瘤细胞和问皮细胞，还需寻找史特异的肿瘤细胞抗体标志物。 【关键词】纳米粒子；胸腔积液，恶性；原位杂交，荧比 The enrichment beadsfortumorcellsfrom effusions negative byimmunomagnetic malignantpleural YANG 8，xu Jun-jimXing—xiang，MINLing乒喈，LINPing，QklNGut—sheng．$Respirator)Department， The88“j PJA．Tatan271000．Chinn Hospitatof attthor：XU r’n，n CorrespondingXing—xiang，Email：z¨cA63@situa Toestal)lisha erait}uncutinmm 【Abstract】0bjectivemethod(negativeby rmmagnetie1)eads)foi’ m detectionoftumor+：ellsin effusionsandto aluatethesensilivitvan(I Lv¨ftheinethotlfor pleural