实时荧光定量pcr检测猪源mx1方法的建立及应用-南京农业大学学报.pdfVIP

摇 南京农业大学学报摇 2013,36(1):92-96 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2013.01.016 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 张小敏,周斌,何丹妮,等.实时荧光定量PCR检测猪源Mx1方法的建立及应用[J].南京农业大学学报,2013,36(1):92-96 实时荧光定量PCR检测猪源Mx1 方法的建立及应用 * 张小敏,周斌 ,何丹妮,庞然,赵津,陈溥言 (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏 南京210095) 摘要:根据GenBank 中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆 了特异性的115bp核苷酸片段。 测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBRGreen 玉 实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。 结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lgX+38郾239 3 2 2 -1 (R =0.9985),灵敏度为1伊10 滋L ;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定 量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1 的表达量最高(P0.01),然后随着时间的增加而缓慢减少。 结论:建立的SYBR Green 玉实时荧光定量PCR方法可以检测poMx1 mRNA 的表达水平。 关键词:猪源Mx1;实时荧光定量PCR;标准曲线 + 中图分类号:S854.4 3摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2013)01-0092-05 Establishment and application of the SYBR Green 玉real鄄time PCR assay for detection of porcine antiviral proteinMx1 gene * ZHANG Xiaomin,ZHOU Bin ,HE Danni,PANG Ran,ZHAOJin,CHEN Puyan (Key Laboratory of Animal Diseases Diagnosis and Immunology,Ministry of Agriculture, Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China) Abstract:On thebasisof thenucleotide sequencesof porcineMx1gene(poMx1)availablein GenBank,apair of primerswasdesigned and synthesizedto amplify a specific 115 bp nucleotide fragment from Mx1 full鄄length gene.Then,the SYBR Green 玉real鄄time PCR assay was established based on 10鄄fold dilution recombinant plasmid asthe amplification template after it was cloned and sequenced.