应用抑制性消减杂交技术筛选脂肪细胞分化相关基因-浙江大学学报.pdfVIP

第４１卷　第３期 浙 江 大 学 学报 （医学 版 ） Ｖｏｌ４１　Ｎｏ３ 　 ２０１２年 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＺＨＥＪＩＡＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ） 　 ２０１２ ｈｔｔｐ： ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｍｅｄ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８９２９２．２０１２．０３．００７ ∥ 应用抑制性消减杂交技术筛选脂肪细胞分化相关基因 易晓青，肖延风，尹春燕，徐尔迪 （西安交通大学第二附属医院儿科，陕西 西安７１０００４） ［摘　要］　目的：利用脂肪分化细胞模型筛选与脂肪细胞分化相关的差异性表达基因。方法：采 用抑制性消减杂交技术，以诱导分化后的人前体脂肪细胞系ＳＷ８７２总ＲＮＡ为Ｔｅｓｔｅｒ，诱导分化前 的人前体脂肪细胞系ＳＷ８７２为 Ｄｒｉｖｅｒ，将消减杂交获得的ＤＮＡ片段与 ｐＧＭＴ载体连接，构建 ｃＤＮＡ文库后，转化大肠杆菌ＤＨ５，筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析，并 α 与ＧｅｎＢａｎｋ数据库进行同源性分析，获得差异性表达基因。结果：扩增消减ｃＤＮＡ文库获得１３５个 白色克隆，随机挑选６４个进行测序，共获得３４个阳性克隆基因。结论：本研究成功构建了脂肪细 胞分化差异性表达基因的消减ｃＤＮＡ文库，筛选出了与脂肪细胞分化相关的差异表达基因。 ［关键词］　肥胖症；基因文库；杂交，遗传；ＤＮＡ，互补／遗传学；克隆，分子；细胞，培养的；细胞 分化／遗传学；脂细胞／遗传学 ［中图分类号］　Ｒ７８１　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１００８９２９２（２０１２）０３０２６７０７ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｙｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ＹＩＸｉａｏｑｉｎｇ，ＸＩＡＯＹａｎｆｅｎｇ，ＹＩＮＣｈｕｎｙａｎ，ＸＵＥｒｄｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆ Ｘｉ′ａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ７１０００４，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｃｒｅｅｎｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏａｄｉｐｏｃｙｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｃｅｌｌｌｉｎｅＳＷ８７２ｗａｓｔａｋｅｎａｓｔｈｅＤｒｉｖｅｒａｎｄｔｈｅ ｔｏｔａｌＲＮＡｆｒｏｍｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄａｄｉｐｏｃｙｔｅｓＳＷ８７２ａｓｔｈｅＴｅｓｔｅｒ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ （ＳＳＨ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｓｏｌａｔｅｔｈｅｃＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓ．ＴｈｅｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＳＳＨ ｗｅｒｅｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐＧＭＴｖｅｃｔｏｒｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｌｉｂｒａｒｙ．ＴｈｅｌｉｂｒａｒｙｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｔｈｒｏｕｇｈＥ． ｃｏｌｉｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．ＮｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｗａｓｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙａｎａｌｙｚｅｄｂｙｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｄａｔａｆｒｏｍＧｅｎＢａｎｋ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１３５ｗｈｉｔｅｃｌｏｎｅｓｉｎｔｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ，６４ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎｒａｎｄｏｍｌｙａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｎｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｓｅａｒｃｈｒｅｖｅａｌｅｄ３４ ｇｅｎｅｓｗｈｉｃｈｅｘｐｒｅｓｓｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｉｎａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｓｕｂｔｒａｃｔｅｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｆｏｒｄ