多肽融合标签的移除策略-生物化学与生物物理进展.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(10): 1364~ 1369 多肽融合标签的移除策略* ** 谢浩 杨 程 陈丽娥 ( 汉理工大学生物科学与技术系，武汉430070) 摘要 多肽融合标签能够赋予目标蛋白新的特性，便于目标蛋白的定位、追踪、纯化以及结构和相互作用研究 但在很多情 况下，尤其是研究蛋白质结构或分离纯化药用蛋白时，需要将多肽融合标签从融合蛋白上切除，以降低和消除多肽融合标签 对目标蛋白结构和功能的影响 可用来切除多肽融合标签的方法主要有4 种，即化学法、内切蛋白酶法、外切蛋白酶法以及 自我剪切法 介绍和 较了每种方法的基本原理、应用以及研究进展 关键词 融合蛋白，多肽融合标签，标签移除，内含肽，蛋白酶 学科分类号 Q5-3，Q51 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00160 融合标签技术是利用DNA 重组技术将不同来 大地降低了scFv 对抗原的结合能力[6] 因此，在研 源的基因或基因片段进行拼接，在基因水平上改造 究蛋白质或酶的性质或功能时，需要充分考虑多肽 目标蛋白，产生含有融合标签的重组蛋白，不仅保 融合标签的影响 对于药用蛋白质而言，融合标签 持原有蛋白质的功能活性，还具有融合标签所特有 不仅可能影响目标蛋白的药效，还会对人体存在潜 的生理生化特性 随着蛋白质组学的发展及药用蛋 在威胁，因而多肽标签的移除变得更为必要 白的研究开发，融合标签技术被广泛地应用于科研 目前主要通过4 种方法移除多肽标签，即化学 及工业领域，尤其在蛋白质分离纯化、膜蛋白结 法、内切蛋白酶法、外切蛋白酶法以及基于内含肽 构研究、蛋白质生理功能研究等方面有着重要作 的自我剪切法 用[1～3] 1 化学方法 虽然一些多肽融合标签能够促进目标蛋白的正 确折叠和溶解，利于蛋白质的表达和定位，但是也 化学方法移除多肽标签需要利用溴化氰 可能对目标蛋白造成不利影响，主要表现在以下两 ( cyanogen bromide ，CNBr )或羟胺( hydroxylamine ) 个方面 处理，所采取的基本策略如下：在目标蛋白与融合 首先，融合标签可能会影响目标蛋白的构象 标签之间插入一个甲氨酸残基，诱导表达并纯化 例如基因调控蛋白AreA 连接多聚组氨酸标签后， 后，用溴化氰或羟胺处理所纯化的融合蛋白，使融 与野生型蛋白相 ，虽然蛋白质的功能没有显著改 合蛋白在插入的甲氨酸残基处断裂，从而使标签从 [4] [7] [8] 变，但是蛋白质构象却发生了细微变化 因此， 目标蛋白脱离 例如Fairlie 等 发展的用于生产 在研究蛋白质结构时，需要移除融合标签，排除和 和纯化含二硫键肽的系统就使用了溴化氰法 他们 减少融合标签对蛋白质结构的影响 将纯化所得到的融合蛋白用溴化氰处理后，利用 其次，融合标签可能会抑制和影响目标蛋白的 活性 例如重组氨基肽酶B 的C 端连上多聚组氨 [5] * 国家自然科学基金和教育部留学回国人员科研启动基 酸标签后，其外切蛋白酶活性降低了近一半 而 金资助项目. 对用于癌症治疗的单抗CC49 单链Fv 片段(scFv) 的 ** 通