枯草芽孢杆菌头孢菌素c脱乙酰基酯酶在大肠杆菌中的-生物加工过程.pdfVIP

第 １５卷第２期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１５ Ｎｏ２ ２０１７年３月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｒ． ２０１７ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１７０２００４ 枯草芽孢杆菌头孢菌素Ｃ脱乙酰基酯酶在 大肠杆菌中的诱导及组成型表达 １ １ １ １ １，２ 朱　 颖 ，马晓强 ，杨胜利 ，魏东芝 ，苏二正 （１ 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 鲁华生物技术研究所，上海 ２００２３７； ２ 南京林业大学 轻工科学与工程学院 酶与发酵工程实验室，南京 ２１００３７） 摘　 要：本研究构建了８种诱导型质粒和 １６ 种组成型质粒，试图实现枯草芽孢杆菌头孢菌素 Ｃ 脱乙酰基酯酶 （ＣＡＨ）基因在大肠杆菌中的高效异源表达。 经过筛选，最终选择带有ｐＵＣ１９上的起始位点、ＳＩＬ 基因、ｔｒｐ 启动子 ３ 以及间隔序列为Ｂ１的组成型表达质粒 ｐＢ１ ＳＩＬ Ｋ 为最佳表达质粒。 将 ＰＢ１ ＳＩＬ Ｋ 转入 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ３ ３ ＤＨ５α，重组菌在３７ ℃发酵培养２４ ｈ，其ＯＤ值达到５４，酶活达到了１３８６１Ｕ／ ｍＬ。 进一步通过培养基组成、培养 条件、放大过程等优化，在７ Ｌ发酵罐上，ＣＡＨ最高酶活达到１３４０ Ｕ／ ｍＬ，为目前国内外文献报道最高水平。 关键词：头孢菌素Ｃ脱乙酰基酯酶；诱导型表达；组成型表达；３′ 脱乙酰基 ７ 氨基头孢烷酸 － － － 中图分类号：ＴＱ９２５　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１７）０２ ００２１ ０９ Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎ⁃Ｃ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｆｒｏｍＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ １ １ １ １ １，２ ＺＨＵ Ｙｉｎｇ ，ＭＡ Ｘｉａｏｑｉａｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｓｈｅｎｇｌｉ ，ＷＥＩ Ｄｏｎｇｚｈｉ ，ＳＵ Ｅｒｚｈｅｎｇ （１Ｎｅｗ Ｗｏｒｌｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅａｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３７，Ｃｈｉｎａ；２Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ