盐酸胍诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶去折叠过程的研究unfolding.pdfVIP

2009 年第 67 卷 化 学 学 报 Vol. 67, 2009 第 8 期, 786～794 ACTA CHIMICA SINICA No. 8, 786～794 ·研究论文· 盐酸胍诱导的淀粉液化芽孢杆菌 α-淀粉酶去折叠过程的研究 a *,a b a 郑会娟 边六交 董发昕 郑晓晖 (a 西北大学生命科学学院 西安 710069) (b 西北大学化学系 西安 710069) 摘要 分别用内源荧光光谱法、荧光相图法、荧光探针法、荧光猝灭法、蛋白质电泳法以及体积排阻色谱法研究了盐 酸胍诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶的去折叠过程. 内源荧光光谱和荧光相图结果表明, 当变性液中盐酸胍浓度约 为 1.0 mol/L 时, 芽孢杆菌α-淀粉酶的去折叠过程中出现一个部分折叠中间体, 其去折叠过程符合“三态模型”; 荧光探 针结果表明, 在溶液中盐酸胍浓度约为 1.0 mol/L 时, 中间态芽孢杆菌α-淀粉酶分子中存在着能够与探针分子 1-苯胺 基-8-萘磺酸(ANS)结合的稳定的疏水区域; 荧光猝灭研究给出了不同程度变性的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶中的 Trp 的分布情况, 结果表明中间态芽孢杆菌α-淀粉酶分子中能够被碘化钾猝灭的位于分子表面的色氨酸残基数目达到最大 的 8 个; 蛋白电泳和体积排阻色谱结果表明, 在盐酸胍诱导的芽孢杆菌α-淀粉酶分子的整个去折叠过程中, 不会以共 价键或非共价键形式形成芽孢杆菌α-淀粉酶分子之间的集聚体或集聚体沉淀. 在此基础上, 对盐酸胍诱导的淀粉液化 芽孢杆菌α-淀粉酶的去折叠过程进行了描述. 关键词 淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶; 去折叠; 折叠中间态; 盐酸胍 Unfolding of Bacillus Amyloliquefaciens α-Amylase Induced by Gua- nidine Hydrochloride Zheng, Huijuana Bian, Liujiao*,a Dong, Faxinb Zheng, Xiaohuia a ( College of Life Science, Northwest University, Xian 710069) b ( Instrumental Analysis Research Center, Northwest University, Xian 710069) Abstract The unfolding of Bacillus amyloliquefaciens α-amylase induced by guanidine hydrochloride was studied by using its i