红鳍东方鲀白介素15的原核表达及其活性测定-大连海洋大学.pdfVIP

第30卷第6期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol.30 No.6 2015年12月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Dec. 2015 DOI:10.16535/ ki.dlhyxb.2015.06.005 文章编号:2095-1388(2015)06-0598-06 红鳍东方鲀白介素15 的原核表达及其活性测定 1 1 1 1 1 2 1 孙赛红 , 马普 , 李慧 , 孙鹤 , 孔德荣 , 李凤华 , 仇雪梅 , 1 3 4 1 姜志强 , 刘海映 , 刘圣聪 , 王秀利 (1郾 大连海洋大学 水产与生命学院, 辽宁 大连 116023;2郾 大连三仪动物药品有限公司, 辽宁大连 116036; 3郾 大连海洋大学 海 洋科技与环境学院, 辽宁 大连 116023;4郾 大连天正实业有限公司, 辽宁 大连 116011) 摘要:为了开发红鳍东方鲀Takifugu rubripes免疫基因及其重组表达, 生产重组免疫因子蛋白, 通过提取 红鳍东方鲀肾脏组织总RNA, 利用RT-PCR技术扩增得到白介素 15 (interleukin15, IL15) 基因序列, 将 IL15成熟肽序列与原核表达载体pET-32a(+)连接, 成功构建重组表达载体 (重组子) pET-32a(+)-IL15, 并将其重组子转化至Escheria coli BL21 (DE3) 感受态细胞中获得重组表达IL15 的基因工程菌, 再经IPTG 诱导, pET-32a(+)-IL15在BL21中得到了融合表达。 结果表明: 通过对表达产物的纯化和WesternBlotting 检测, 红鳍东方鲀IL15在大肠杆菌中的表达量较高, 蛋白浓度为294郾6 滋g/ mL; 用MTT法对该蛋白进行活 性鉴定显示, 加入稀释10倍和100倍的重组红鳍东方鲀IL15蛋白时, CTLL-2细胞的增殖率相对较高, 分 别为71%和73%。 研究表明, 重组红鳍东方鲀IL15蛋白具有体外促进CTLL-2细胞增值的能力。 关键词:红鳍东方鲀; 白介素-15; 原核表达; 活性鉴定 中图分类号: S965郾225摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 红鳍东方鲀 Takifugu rubripes 是一种重要的海 因子, 存在于多种细胞和组织中, 具有促进淋巴细 水养殖鱼类。 近年来, 由于海水养殖环境的恶化及 胞活性和NK细胞增殖并增强其生物活性的作用。 该品种个体抗病力的弱化, 红鳍东方鲀病害时有发 此外, IL15能刺激T细胞增殖、 诱导B细胞增殖、 生, 给养殖生产和出口创汇造成了严重的经济损 刺激免疫球蛋白分泌、 诱导特性抗原产生、 激活信 [1] [7] [8] 失 。 随着红鳍东方鲀高密度、 工厂化、 集约化 号转导和转录激活蛋白等多种功能 。 Bei等 克 养殖模式的建立和推广, 养殖面积不断扩大, 病害 隆了红鳍东方鲀的IL15 基因, 基因全长 817 bp, 问题也随之逐年严重。 抗生素和化学药物的过度使 其中编码序列504 bp, 编码167个氨基酸; 红鳍东 用, 不仅造成水环境的污染, 而且导致部分病原微 方鲀IL15 包含4 个保守的半胱氨酸, 使2 个二硫 生物耐药性增加并在水产动物体内残留, 严重影响