组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响.pdfVIP

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2017-11-29 发布于天津
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组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响.pdf

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组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响

20 卷 3 期生命科学研究灾燥造援20 晕燥援3 圆园16 年6 月蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻砸藻泽藻葬则糟澡 Jun. 圆园16 DOI ：10.16605/ki.1007-7847.2016.03.006 氨酸标签位置对重鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响 1, 2, 3 1 1 4 1* 君燕 , 谭海东, 王文霞, 杜昱光, 尹恒 (1. 国科学院大连化学物理研究所天然产物与糖工程研究组, 国辽宁大连 116023; 2. 大连大学医学院, 国辽宁大连 116022; 3. 国科学院大学国北京 100049; 4. 国科学院过程工程研究所中国北京 100190) 要: 为了研究His -tag 标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857 外切菊粉酶 (K luyv eromyces cicerisp orus 6 CBS4857 exo-inulinase, KcINU 1)酶活性的影响, 实验首先根据Swiss-Model 构建的KcINU1 三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1 的位置, 然后将编码His -tag 的基因通过PCR 方法分别引入到kcINU 1 的N 端和C 端, 并 6 将重组的kcINU 1 基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZ A, 重组质粒进一步经电转化法整到毕赤酵母宿主菌X-33 中, 最后用甲醇诱导进行分泌表达, 镍柱亲和层析法纯化目的蛋白, DNS 法进行外切菊粉酶的活性测定结果显示, 实验中成功表达了具有活性的尧His -tag 标签位置不同的重组蛋白, 并且N-His -KcINU1 糖基化 6 6 程度比KcINU1-His -C 高, 后者的比活是前者的82.2%, 表明N 端携带His -tag 标签不影响蛋白的糖基化修 6 6 饰, 可以保持较高的酶活该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1 奠定了基础, 对糖苷水解酶32 家族标签位置的选择具有指导意义