组织工程化皮瓣的构建-南方医科大学学报.pdfVIP

2012;32(4) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·519 · 基础研究 组织工程化皮瓣的构建 陈 伟，姜 平，陈晓炜，廖云君，高建华 南方医科大学南方医院整形外科，广东 广州 510515 摘要：目的应用脂肪组织来源干细胞（ASCs）在体外构建组织工程脂肪并与已构建的复合皮组装培育，试构建出含脂肪层的组 织工程化皮瓣。方法（1）构建组织工程脂肪从脂肪组织中分离培养ASCs 并进行三系分化诱导鉴定。ASCs 与胶原凝胶混合并 进行体外成脂诱导，诱导15 d 后分别进行倒置显微镜、油红O 染色及HE 染色观察。（2）构建复合皮从包皮组织中分离培养表皮 细胞（Kc）和成纤维细胞（Fb）。Fb 与胶原凝胶混合后培养5 d ，将Kc 接种到含有Fb 的凝胶表面，在液面下培养4 d 后移至气-液 界面继续培养10 d形成复合皮。（3）构建含皮下脂肪组织的3层结构的皮肤复合组织将培养的复合皮与脂肪组织按正常皮肤结 构顺序组装后继续培养3 d 并行HE 染色观察。结果（1）ASCs 具有成脂、成软骨和成骨分化能力。ASCs 凝胶复合物体外成脂 诱导15 d 后，可见细胞内充满圆形脂滴，呈单房或多房形，油红O染色及HE 染色均显示为成熟脂滴。（2）经过气-液界面培养后， Kc 成层分化，形成基底上层。（3）组装培育后的皮肤复合组织分3层，表层Kc 成层分化并形成基底上层；中层和底层连接处细胞 聚集；成脂分化的ASCs 位于底层。结论分别应用Kc、Fb 和ASCs 三种细胞，在体外构建出组织工程化脂肪和复合皮，且按序组 装培育，可构建出组织工程化皮瓣。 关键词：脂肪组织来源干细胞；组织工程皮肤；脂肪组织工程；组织工程 中图分类号：R318.08; Q813 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）04-0519-04 doi: 10.3969/j.issn. 1673-4254.2012.04.017 /kcms/detail/44.1627.R1644.001.html Construction of tissue-engineered skin flap in vitro CHEN Wei, JIANG Ping, CHEN Xiaowei, LIAO Yunjun, GAO Jianhua Department of Plastic Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To construct a tissue-engineered skin flap using composite skin and adipose tissue constructed by adipose-derived stem cells(ASCs). Methods Human ASCs isolated from adipose tissue were cultured and identified for their adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation potentials. ASCs were then mixed with collagen gel for adipogenic induction and observed 15 days later with inverted microscope, oil-red O staining and HE staining. To construct the composite skin, keratinocytes and fibroblasts were isolated from human foreskin. The fibroblasts were mixed with collagen gel and cultured for 5 days, and keratinocytes were seeded on the ge