应用实时荧光RT-PCR检测柑橘黄化脉明病毒.pdfVIP

园艺学报，2016 ，43 (1) ：168 –174. Acta Horticulturae Sinica 168 doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0774；http ：//www. ahs. ac. cn 应用实时荧光RT-PCR检测柑橘黄化脉明病毒 1 1 1 1 2 1,* 陈洪明 ，周 彦 ，王雪峰 ，周常勇 ，杨秀燕 ，李中安 1 2 （西南大学/ 中国农业科学院柑桔研究所，国家柑桔工程技术研究中心，重庆 400712 ； 安岳县柠檬科学技术研究 所，四川安岳 642300 ） 摘 要：为更快速准确检测柑橘黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus，CYVCV ），根据病 毒外壳蛋白基因的保守序列设计特异性引物，通过体系优化得到最佳反应条件，建立基于 SYBR Green Ⅰ 的 CYVCV 实时荧光 RT-PCR 检测方法。该方法可特异性检测 CYVCV，而测试的柑橘衰退病毒、碎叶病 毒等 5 种柑橘病毒均不能检测出。灵敏度较普通 RT-PCR 提高了 100 倍，标准曲线循环阈值与模板浓度呈 良好的线性关系，扩增效率和相关性系数分别为 102%和 0.999 。对田间样品的检测结果表明，建立的实 时荧光RT-PCR 适用于检测不同柑橘品种中 CYVCV 的含量。 关键词：柑橘；柑橘黄化脉明病毒；实时荧光 RT-PCR ；检测；应用 中图分类号：S 666 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2016 ）01-0168-07 Detection of Citrus yellow vein clearing virus Based on a Real-time RT-PCR Approach 1 1 1 1 2 CHEN Hong-ming ，ZHOU Yan ，WANG Xue-feng ，ZHOU Chang-yong ，YANG Xiu-yan ，and LI Zhong-an1,* 1 （Citrus Research Institute，Southwest University ，Chinese Academy of Agricultural Sciences，National Citrus Engineering 2 Research Center ，Chongqing 400712 ，China； Lemon Science and Technology Institute ，Anyue ，Sichuan 642300 ，China ） Abstract ：To develop a rapid and reliable detection method，a real-time RT-PCR system based on SYBR Green Ⅰwas established by using a pair of specific primers designed from conserved coat protein gene of Citrus yellow vein