疟疾的试验室诊断技术-厦门疾病预防控制中心.pdf

疟疾的实验室诊断技术 镜检 林 耀 莹 福建省寄生虫病QQ群:210795126 福建省疾病预防控制中心 Fujian provincial center for disease control prevention 2014年全球流行概况 疟疾病例：2.14亿 死亡病例：43.8万 非洲：占疟疾病例88%, 占死亡病例 90%，死亡病例中5岁以下儿童有29.2万 全球30.6万）。 疟疾不再是撒哈拉沙漠以南非洲地 区儿童死亡最主要原因 （第四），每两 分钟引起一个儿童的死亡。 • 间日疟病例：1380万，占除非洲以外地区疟疾 病例的一半。 • 东南亚74%，东部地中海地区11%，非洲10%。 超过80% 的间日疟在埃塞俄比亚、印度和巴基斯 坦三个国家。 • 间日疟死亡：1400-14900例。 • 恶性疟抗青蒿素：大湄公河次区域的五个国家 （缅甸、老挝、柬埔寨、泰国、越南） • 马来西亚2014年有2551例动物源性疟疾P. knowlesi感染。 World Malaria Report2015 屠呦呦- 2015诺贝尔医学奖 疟原虫  疟疾的病原体；  单核真核细胞；  原生动物亚界、顶端复合物门、孢子纲 、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。 感染人的五种：pv、pf、pm、po、pk 疟疾诊断最常用方法 1、镜检:WHO推荐 “金标准” 2、快速诊断试验：RDTs （Rapid Diagnostic Tests）胶体金法 3、基因诊断技术:PCRpolymerase chain reaction，目前确诊依据 一、快速诊断试验RDTs 免疫胶体金法，双抗体夹心检测全血 样本疟原虫特异性抗原。 原理：通常测试是基于HRP2 （富组氨 酸蛋白2 ）用于pf特异性检测，以及采用 泛特异性或属特异性pLDH （乳酸脱氢 酶）或是泛特异性醛缩酶 （灵敏度 100/µL），有针对pf、pf/pv、pf/pan等组 合产品，可以检测常见五种疟原虫。 如果不表达醛缩酶/pLDH靶基因的 话，会出现测不出结果。总体上HRP2检 出率比pLDH高。 有资料显示，南美洲部分地区感染 疟疾，是不表达HRP2。 美国：CareStart™ 疟疾 HRP2/pLDH (Pf/PAN) 组套测 试 1、优点 –快速 （一般2-15min）； –无需熟练的检测人员； –流行区筛查； –辅助方法，加强疟疾诊断和提高总体的 卫生服务。 2、缺点 (1)假阳性结果：高免疫状态 （类风关、 红斑狼疮等）。 (2)无法分辨新感染和复发。 (3)靶点HRP2抗原在有效治疗后，血液中 会维持1-3周左右。 (4)无法预测准确的敏感度 （受环境、温 度、湿度、保存等影响较大）。 二、基因诊断 样本要求： 1、抗凝血：EDTA Na2 /K2血常规紫色管 2、滤纸血：Whatman903 • 巢式PCR鉴别疟原虫种类，最低检测4.4ps/ μl • 目标序列：疟原虫18ssrRNA基因。疟原虫属特 异性引物rPLU5和rPLU6的目标序列长约1200bp • 依据产物长度，便能判断疟原虫的种类： 恶性疟原虫的扩增条带是205bp； • 间日疟原虫的扩增条带是120bp； • 三日疟原虫的扩增条带是144bp； • 卵形疟原虫的扩增条带约为800bp （两个亚 种，该引物只能做出经典亚种curtisi ） PCR准确、可靠，但花费高，人员、 仪器要求高 （专门P