第14章_DNA的生物合成1.ppt

dNTP DNA-pol γ D环复制(D-loop replication) 是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。 三、真核生物线粒体DNA按D环方式复制 D-环复制时需合成引物。mtDNA为双链，第一个引物以内环为模板延伸。至第二个复制起始点时，又合成另一个反向引物，以外环为模板进行反向的延伸。最后完成两个双链环状DNA的复制。复制中呈字母D形状而得名。 D环复制的特点是复制起始点不在双链DNA同一位点，内、外环复制有时序差别。 第一篇报道分离耐高温DNA聚合酶的工作，是一位来自台湾的年轻科学家。1973年，钱嘉韵随着留学热潮到俄亥俄州的辛辛那提大学生物系就读。她的指导老师崔拉（J. Trela)对一种黄石公园的热泉里发现的嗜热菌（Thermus aquaticus）感到好奇，就让钱及另一位美国学生以该细菌为论文研究的主题。在另一位老师的指导下，钱学会了从细胞中分离蛋白质，成功分离出该细菌耐高温的Taq DNA聚合酶。 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。 四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题 端粒的发现 科学家们在寻找导致细胞死亡的基因时，发现了一种叫端粒的存在于染色体顶端的物质。端粒本身没有任何密码功能，它就像一顶高帽子置于染色体头上。在新细胞中，细胞每分裂一次，染色体顶端的端粒就缩短一次，当端粒不能再缩短时，细胞就无法继续分裂了。这时候细胞也就到了普遍认为的分裂100次的极限并开始死亡。因此，端粒被科学家们视为“生命时钟”。 前导链产生完整的子染色单体。 后随链3?端留下缩短的未复制的ssDNA区。 5? 3? 3? 5? 5? 3? 3? 5? + 5? 3? 3? 3? 3? 5? 5? 端粒（telomeres）由富含TG的重复序列组成。 人的端粒重复序列为5’-(TnGn)x-3?。 是DNA和蛋白质的复合体 5...TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG..3? 这些重复序列多为双链，但每个染色体的3’端比5?端长，形成单链ssDNA。这一特殊结构可解决染色体末端复制问题。 端粒酶 端粒结构不是DNA-pol催化的，而是端粒酶催化的 注意：端粒酶就是端粒酶，不是DNA聚合酶 端粒酶(telomerase) 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 组成：由三个部分组成 1997年，人类端粒酶基因被成功克隆 端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白（RNP），由RNA和蛋白质组成。 端粒酶以自己的RNA组分作为模板，以染色体的3?端ssDNA（后随链模板）为引物，将端粒序列添加于染色体的3?端。这些新合成的DNA为单链。 端粒酶催化作用的爬行模型 端粒酶是研究热点 端粒也许与细胞的寿命有关 端粒也许与肿瘤有关 人成纤维细胞 生殖细胞 肿瘤细胞 是不是生物钟 可不可以被影响 真核所有染色体DNA复制仅仅出现在细胞周期的S期，而且只能复制一次。 五、真核生物染色体DNA在每个细胞周期中只能复制一次 前复制复合物在G1期形成而在S期被激活 真核细胞DNA复制的起始分两步进行，即复制基因的选择和复制起点的激活。 复制基因（replicator）是指DNA复制起始所必需的全部DNA序列。 复制基因的选择出现于G1期，基因组的每个复制基因位点均组装前复制复合物（pre-replicative complex，pre-RC）。 复制起点的激活出现于细胞进入S期以后，这一阶段将激活pre-RC，募集若干复制基因结合蛋白和DNA聚合酶，并起始DNA解旋。 在原核细胞中，复制基因的识别与DNA解旋、募集DNA聚合酶偶联进行。而在真核细胞中，这两个阶段相分离可以确保每个染色体在每个细胞周期中仅复制一次。 ORC至少募集两种解旋酶加载蛋白Cdc6和Cdt1。 复制起点识别复合物（origin　recognition complex，ORC）识别并结合复制基因。 三种蛋白质一起募集真核细胞解旋酶Mcm2-7。 前复制复合物（pre-RC）的形成 pre-RC磷酸化导致在复制起点组装其它复制因子并起始复制，复制因子包括3种DNA聚合酶。 DNA聚合酶在复制起点按一定顺序组装：首先Pol ?和Pol ?结合，然后是Pol ?/引发酶。 在S期，pre-RC被蛋白激酶（Ddk和Cdk）磷酸