Cre-loxp系统的构建及无选择标记转基因苹果植株的获得.pdfVIP

园艺学报，2016 ，43 (2) ：205 –217. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0579；http ：//www. ahs. ac. cn 205 Cre/loxp 系统的构建及无选择标记转基因苹果 植株的获得 李茂福，王媛花，王 华，金万梅* （北京市农林科学院林业果树研究所，北京市落叶果树工程技术研究中心，农业部华北地区园艺作物生物学与种质 创制重点实验室，北京 100093 ） 摘 要：利用 Cre/loxp 系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统，特异性地敲除转 基因植物的选择标记基因。通过多重酶切、连接及测序后成功构建植物表达载体 pBI121-Cre-GUS。利用 农杆菌介导的叶盘法将此目标基因转入平邑甜茶中，通过抗性筛选和 PCR 鉴定获得转基因阳性植株。对 阳性植株进行热激诱导后通过PCR 及 GUS 染色进行检测转基因植株的删除效果，最终获得了无选择标记 基因的转基因苹果植株。 关键词：平邑甜茶；烟草；Cre/loxp 重组删除系统；无选择标记