生物素化FOXM1真核表达体系的构建及鉴定.PDFVIP

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2018-06-06 发布于天津
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生物素化FOXM1真核表达体系的构建及鉴定

20 卷 1 期生命科学研究灾燥造援20 晕燥援1 圆园16 年2 月蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻砸藻泽藻葬则糟澡 Feb. 圆园16 DOI:10.16605/ki.1007-7847.2016.01.003 物素化FOXM 1 真核表达体系的构建及鉴定红春谭桂湘谭拥军* 湖南大学生物学院，中国湖南长沙410082 ）要建立基于生物素AP-tag 标签的FOXM 1 真核表达载体, 利用生物素与链霉亲和素的高特异性尧高亲和力的结合性质对FOXM1 蛋白进行纯化, 为后续鉴定其互作分子的研究奠定基础遥分别构建真核表达载体 pcDNA3.1-AP-FOXM1 和大肠杆菌生物素连接酶BirA 真核表达载体pcDNA3.1-BirA 将pcDNA3.1-AP-FOXM1 和pcDNA3.1-BirA 共转染人胚肾293T(HEK293T)细胞用银染及Western 印迹检测细胞裂解液确定相关蛋白表达曰用链霉亲和素琼脂糖珠纯化生物素标记的FOXM1 并考察FOXM1 的互作蛋白是否可以同时被洗脱下来遥研究发现构建的生物素标签真核表达体系能有效表达生物素化的目标蛋白FOXM1 曰该蛋白在Western 印迹尧pull-down 等实验中可实现无需抗体的一步法应用曰该体系可用于FOXM1 互作蛋白的鉴定和功能分析遥结果表明建立了基于生物素AP-tag 标签的FOXM 1 真核表达体系为FOXM1 互作蛋白与功能的深入研究奠定了技术基础遥关键词生物素化FOXM 1曰BirA 生物素连接酶曰HEK 293T 细胞曰亲和纯化曰蛋白印迹：中图分类号 Q784 文献标识码 A 文章编号 1007-7847(2016)01-0016-05 Construction and Identification of Biotinylated FOXM1 Eukaryotic Expression System ZOU Hong-chun, TAN Gui-xiang, TAN Yong-jun* (College of Biology, H unan Unive rs ity, Changsha 410082, H unan, China) Abstract: To construct the eukaryotic expression vector for biotin AP-tagged FOXM 1 and purify the biotin- labeled FOXM1 based on the high specificity, high af