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棉花GhSKIP-35基因的克隆与表达分析
棉 花 学 报 Cotton Science 20 15袁27 2 冤院111 117
棉花 35 基因的克隆与表达分析
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刘凯 张华崇 齐放军 张文蔚 简桂良
( 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室 北京 100193 )
摘要院以中植棉KV 1 SSH 文库为基础 从陆地棉中植棉KV1 中克隆出来泛素途径 35 基因 命名为
35 遥该基因的开放阅读框全长为 1863 个核苷酸 编码620 个氨基酸 含有 1 个ANK 保守结构域遥进化分
析表明 GhSKIP35 蛋白与甜橙( ) 的SKIP35 蛋白相似性最高遥 qRT-PCR 分析显示院在接种大丽轮
枝菌V991 菌系 初期 35 基因表达量激增 12 h 便可达到顶峰 24 48 h 逐渐下降 推测它在陆地棉
抗黄萎病早期防卫反应 起重要作用遥 利用VIGS(Virus induced gene silencing)技术 在中植棉KV1 成功地
沉默 35 基因曰对沉默棉株接种大丽轮枝菌V991 鉴定显示 其病情指数为50.75 而野生型的 植棉
KV1 和转化空载体棉株的病情指数分别为9.38 和11.54遥 35 基因沉默 植棉KV1 对黄萎病的抗
性丧失 表明 35 基因在陆地棉抗黄萎病的过程 起重要作用遥
关键词院棉花曰大丽轮枝菌曰 35 曰qRT-PCR 曰VIGS
中图分类号院S435.621 文献标志码院A
文章编号院1002-7807(2015)02-0 111-07 院10.11963/issn.1002-7807.201502003
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Liu kai, Zhang Huachong, Qi Fangjun, Zhang Wenwei , Jian Guiliang
( 100193,
)
A new gene, 35, was cloned from cotton cultivar Zhongzhimian KV 1, which was selected by screening a sup-
pression subtractive hybridization library of Zhongzhimian KV 1. The open reading frame (ORF) was 1863 nucleotides (nts) long
and encoded a protein of 620 amino acids. The putative protein contains a conserved ANK domain. The cloned gene was most
closely related to SKIP35 protein by phylogenetic analysis. Real-time quantitative reverse
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