沙门菌的检验技术.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * C.乳糖（蔗糖）发酵型 三糖铁（TSI）试验 肠道杆菌科为革兰氏阴性菌，可发酵葡萄糖产酸。 利用糖类发酵之不同与硫化氢产生与否，加以区分。 三糖铁琼脂斜面培养基含有1﹪乳糖及蔗糖与0.1﹪葡萄糖作为发酵基质，且以酚红作为酸碱指示剂，如培养基由橘红转为黄色，表示有糖类发酵 三糖铁（TSI）琼脂试验 本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 a. uninoculated b. little change/alkaline/-/- c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-  slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production 制好的培养基 对照管 斜面红色， 底面黄色 培养基全黄色 斜面、底部黄色，并产生H2S 斜面红色，底部黑色，产生H2S 底面黄色，并产生CO2 （1）斜面碱性（红色-）底部酸性（黄色+）产气或不产气（产气时会造成琼脂裂开）：表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸，使培养基变黄，但因葡萄糖含量低，于斜面产生之微量酸立即氧化而呈碱性反应，同时培养基中的蛋白质也随之利用而产碱，培养基底部则因氧张力较小，且微生物生长较慢，故仍维持酸性反应。 （2）斜面酸性（黄色+）底部酸性（黄色+）产气或不产气：表示除了葡萄糖发酵外，乳糖与（或）蔗糖也发酵。由于乳糖与蔗糖浓度高，经继续发酵，可维持培养基斜面与底部保持酸性反应。 （3）斜面碱性（红色-）底部碱性（红色-）或无变化（橘红色）：表示无糖类发酵。而蛋白质则于有氧或厌氧条件下进行代谢产生氨，而使培养基呈碱性反应，如有氧与厌氧均发生蛋白质分解，则斜面与底部均呈碱性反应。 为使结果准确，应于接种培养18-24小时内观察结果，以确保糖类尚未用尽，且蛋白质分解之碱性终产物尚未产生。 培养基变黑 （4）三糖铁琼脂培养基中亦含有硫代硫酸钠 若微生物有硫化氢产生，会与亚铁离子作用生成不溶性硫化亚铁之沉淀，进而使培养基变黑。 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 斜面 底层 产气 硫化氢 可能的菌属和种 － ＋ ＋/－ ＋ 沙门氏菌属、弗劳地氏柠檬酸 杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德 华氏菌 ＋ ＋ ＋/－ ＋ 沙门氏菌Ⅲ、弗劳地氏柠檬酸 杆菌、普通变形杆菌 － ＋ ＋ － 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、 蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌， 普罗菲登斯菌属 － ＋ － － 伤寒沙门氏菌，鸡沙门氏菌、 志贺氏菌属、大肠埃希氏菌、 蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌， 普罗菲登斯菌属 ＋ ＋ ＋/－ － 大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克 雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗 劳地氏柠檬酸杆菌 注：＋阳性；－阴性；＋/－ 多数阳性，少数阴性 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表 反应序号 硫化氢 （H2S） 靛基质 pH7.2尿素 氰化钾 （KCN） 赖氨酸脱羧酶 判定结果 A1 ＋ － － － ＋ 沙门氏菌属 A2 ＋ ＋ － － ＋ 沙门氏菌属（少见）缓慢爱 德华氏菌 A3 ＋ － ＋ ＋ － 弗劳地氏柠檬酸杆菌、奇异 变形杆菌 A4 ＋ ＋ ＋ ＋ － 普通变形杆菌 B1 － － － － － － － － ＋ － 沙门氏菌属、大肠埃希氏 菌、甲型副伤寒沙门氏菌 大肠埃希氏菌、志贺氏菌属 B2 － － ＋ ＋ － － － ＋ － 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌、志贺氏菌属 B3 － － － － ＋/－ ＋ ＋ ＋ ＋ － 克雷伯氏菌族各属阴沟肠杆 菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌 B4 － ＋ ＋/－ ＋ － 摩根氏菌，普罗菲登斯菌属 注1：三糖铁琼脂底层均产酸，不产气者可排除；斜面产酸与产气与否均不限。 注2：KCN和赖氨酸可选作其中一项，但不能判定结果时，仍需补做另一项。 注3：＋表示阳性；－表示阴性；＋/－表示多数阳性，少数阴性。 a）抗原的准备 一般采用 1.2％～1.5％琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如2 ％～3％） 培养基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在0.55％～