第4章 核酸的化学.pptVIP

* 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.6 核酸的性质 4.7.1 一般理化性质 为两性电解质，通常表现为酸性。 DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末，不溶于有机溶剂。 DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 能够被酸、碱或酶水解。 利用核糖和脱氧核糖不同的显色反应鉴定DNA与RNA。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.7.2 核酸的紫外吸收性质 核酸的碱基具有共扼双键，因而有紫外吸收性质，吸收峰在260nm（蛋白质的紫外吸收峰在280nm）。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 天然DNA 变性DNA 核苷酸总吸收值 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30～40% 当核酸变性或降解时光吸收值显著增加（增色效应） 但核酸复性后，光吸收值又回复到原有水平（减色效应）。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.7.3核酸结构的稳定性 碱基堆积力 碱基对间的氢键 环境中的正离子。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.7.4 核酸的变性 双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规线团状，只涉及次级键的破坏，磷酸二酯键不断裂。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * DNA变性是个突变过程，类似结晶的熔解。将紫外吸收的增加量达到最大增量一半时的温度称熔解温度(melting temperature, Tm)。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 影响Tm的因素 G-C的相对含量 介质离子强度低，Tm低。 高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键的能力。 变性剂如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键，妨碍碱基堆积，使Tm下降。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.7.5 核酸的复性（退火） 变性核酸的互补链在适当条件下重新缔合成双螺旋的过程。 复性后，核酸的紫外吸收降低，这种现象叫减色效应。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 影响复性速度的因素： 溶液温度的高低(Tm-25℃) 单链片段浓度的高低(高，快) 单链片段的大小(小，快) 片段内重复序列的多少(多，快) 溶液离子强度的大小 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.7.6 分子杂交 在退火条件下，不同来源的DNA互补区形成氢键，或DNA单链和RNA链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 探针：用放射性同位素或荧光标记的DNA或RNA片段。 原位杂交技术：直接用探针与菌落或组织细胞中的核酸杂交，未改变核酸所在的位置。 点杂交：将核酸直接点在膜上，再与核酸杂交。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * Southern印迹法：将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，再进行杂交。 Northern印迹法：将电泳分离后的RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交。 DNA芯片 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 4.8 核酸序列的测定 Sanger 双脱氧末端链终止法 PCR 电泳 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 放射自显影 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * DNA的自动测序 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 提 要 　　核酸是遗传的物质基础。各种生物都含有两类核酸，即核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。病毒只含有DNA或RNA。DNA是遗传信息的载体，其绝大部分存在于细胞核内。RNA与蛋白质的合成密切相关，主要分布在细胞质中。 　　核酸分子主要由碳、氢、氧、氮和磷等元素组成，含磷量为9％～10％，可通过测定磷含量来估计样品中核酸含量。核酸的基本组成单位是核苷酸，核酸是由数十个到数十万个核苷酸连接而成的，故也称为多核苷酸。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 核苷酸由碱基、戊糖和磷酸组成。碱基又分为嘌呤碱和嘧啶碱两类。戊糖可分为核糖和脱氧核糖。DNA中的碱基和戊糖与RNA的有所不同。DNA分子中主要有A(腺嘌呤)、T(胸腺嘧啶)、G(鸟嘌呤)和C(胞嘧啶)四种碱基，戊糖为脱氧核糖；RNA分子中碱基成分多为A、U(尿嘧啶)、G和C，戊糖为核糖。此外，DNA和RNA还含有少量稀有碱基。 　　碱基和戊糖缩合后的生成物称核苷。嘌呤和嘧啶可分别与核糖以糖苷键相连，形成嘌呤核苷或嘧啶核苷。嘌呤和嘧啶同样也可与脱氧核糖以糖苷键相连，形成各种脱氧核苷。核苷与磷酸以磷酯键相连，可形成2′-，3′-或5′-核糖核苷酸。脱氧核苷与磷酸借助磷酯键相连可形成3′-或5′-脱氧核糖核苷酸。 * 生物化学 第4章 核酸的化学 * 在生物体内大量游离存在的