体内药物分析 生物样品与样品制备.pptVIP

第一节 生物样品的种类、采集、制备 与贮存一、生物样品的种类、采集和制备  （一）血液1. 血样的采集  供测定的血样应能代表整个血药浓度，因而应待药物在血液中分布均匀后取样。 动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。 对于病人，通常采取静脉血。 当血药浓度高和分析方法灵敏时，也可从毛细管（手指、耳垂、脚趾）采少量血。 （1）血浆(plasma)的制备： 血液置含有抗凝剂（如：肝素、草酸盐等）的试管中，混合后，离心，分离血细胞，淡黄色上清液即为血浆。 肝素是一种含硫酸的粘多糖，常用其钠盐、钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白。一般1ml的全血需加0.1—0.2mg的肝素。加入血样后立即轻轻旋摇，但勿太猛烈，以免导致血细胞破裂。 (2)血清的制备 采集的静脉血液置试管中，放置30 min到1 h，由于激活了一系列凝血因子，血中的纤维蛋白原形成纤维蛋白，血液逐渐凝固，离心后上层澄清的淡黄色液体即为血清。 （3）全血的制备 采集的血液置于含有抗凝剂的试管中，轻轻混匀，不离心，防止凝血，保持血浆和血细胞混合在一起。  需要测全血中血药浓度的情况：测定平均分布于血细胞内、外的血药浓度血浆药物浓度波动大，且难以控制血浆药物浓度太低 （二）尿液 尿药测定的目的与血液、唾液样品不同，主要用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度的研究，并可推断患者是否违反医嘱用药，预测药物的代谢过程及测定代谢类型 体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物（conjugates）等形式排出。 尿液中药物浓度较高，收集量可以很大；因属于非损伤性采样方式，收集方便。但由于易受食物种类、饮水多少、排汗情况等影响，并且在尿液排出过程中，不仅包括肾小球的滤过，还包括肾小管的重新吸收，因此，尿药浓度变化较大，与血药浓度的相关性很不理想。 尿样 优点： 容易获得，属非损伤性取样，且样品量大；尿中药物浓度高，含有缀合物或代谢物，是研究代谢物结构的首选样品；蛋白含量极低，不需去蛋白处理。 缺点： 与血药浓度不相关，难以反映药物作用过程；受肾功能、pH影响；难以定时定量取样，易污染；所含成分复杂，已知其中有紫外吸收的化合物就达数十种。 尿样测定多用于药物排泄、生物转化研究。 （三） 唾液 腮腺分泌水、淀粉酶 舌下腺、颌下腺分泌粘液和浆液质的混合液 唾液分泌量1200ml 蛋白含量为血浆的十分之一 PH6.2-～7.4，变化大  缺点： 唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动；因此，唾液中的药物浓度与血浆中的游离型药物浓度相比就容易变动； 唾液中药物浓度与血浆中药物浓度的比值(S/P)只有少数药物是恒定值。 有些与蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度比血浆浓度低得多，需要高灵敏度的分析方法才能检测到 对有些患者（昏迷）不能采集唾液样品。 (四) 组织 （五） 头发 二、生物样品的贮存与处理 （二）有时，还应考虑加入稳定剂： 酶抑制剂：一些酯类药物，如普鲁卡因、阿糖胞苷，易受血浆酯酶作用而发生水解，则应在采样后立即加入酶抑制剂如氟化钠等。 抗氧化剂：一些易氧化的药物，可加入维生素C或其它抗氧化剂。如血浆中儿茶酚类药物常规保存仅4周，若加入适量VC，则能保存10周。 奥氮平很容易被空气氧化，因此在样品的储存和提取时加入了25%的维生素C 溶液10ul 作为抗氧剂 第二节 生物样品的预处理与制备 进行体内药物分析时，除了极少数情况下只需将样品进行简单处理就可以直接测定外，都要采取分离、净化、浓缩、化学衍生化等预处理技术，为测定创造良好的条件。 样品预处理是体内药物分析中极为重要的环节，也是分析中最困难、最繁复的工作。由于药物在体内存在形式不同、待测药物浓度低、生物介质组份繁杂、待测药物类型众多、理化性质各异等原因，对生物样品的预处理很难规定固定的程序和模式，而必须结合实际情况，采取适当的分离、净化、浓集、化学衍生化等技术。 二、样品制备时应考虑的问题 二、样品制备时应考虑的问题 （一）经有机破坏的方法 （二）去除蛋白质 （三）分离、纯化与浓集 1. 液-液萃取法（LLE） 补充几点科研中的心得 液-液回提（多次提取） 对于碱、酸性药物，在有机溶剂初次提取后，调节适当的pH值，使药物变成离子型，用水把药物回提（反提取）（back extractio