酶抑制法快速检测食品中农药残留及重金属的研究现状及展望.docVIP

酶抑制法快速检测食品中农药残留及重金属的研究现状及展望 摘 要：本文综述了酶抑制法测定食品中农药和重金属残留的原理，检测中常用的酶类、检测技术以及酶抑制法在实际应用过程中的问题。酶抑制法具有检测时间短、成本低、操作简便等特点，是目前我国农药残留及重金属检测的一种有效的初筛方法。 关键词：酶抑制；农药残留；重金属；快速检测 前言 对日益严峻的全球化环境污染问题，环境工程技术与生物技术的结合发展，为环境保护污染治理提供了新的技术手段。传统的污染治理方法存在着诸多的自身缺陷。主要表现在：处理效率低下、占地广、浪费土地资源和能源、处理成本高、效果不尽理想、容易产生新废弃副产物，甚至产生新的污染源。所以以环境生物技术为新技术体系解决环保污染成为当今乃至未来发展的方向。而酶与酶技术的开发与应用是环境生物技术中重要的部分。现代研究表明，酶与酶技术与环境保护的关系十分密切。酶与酶技术以实际应用的要求为目的，利用酶的催化特性对对象进行有用物质的生产或有害废物的分解。几年来，环保用酶制剂与酶技术已经开始引起学术界的关注。 由于农药和化肥的滥用或使用不当，蔬菜中农药和重金属残留严重影响了人们的健康[1]。随着人们生活水平的提高和环境意识的不断加强，食品中农药和重金属残留问题越来越受到人们的关注。为了保障消费者的安全和健康，提高农产品的质量安全水平，增强农产品的国际竞争力，我国政府决定加强蔬菜中农药和重金属残留的监控，建立健全农药及重金属残留的监测体系[2]。目前我国已经发展了很多切实可行的检测技术，其中，酶抑制技术具有快速、简便、灵敏及成本低等优点，深受广大基层监督部门、生产基地及市场的欢迎。 1 酶抑制速测技术原理简介 酶抑制法是一种简便、灵敏、经济的快速检测方法，目前在有些国家已经推广应用，在我国一些大城市，如北京、上海、南京、厦门等城市的蔬菜批发市场也建立了快速检测试验室。对上市的蔬菜进行粗筛，严禁农药和重金属残留明显超标的蔬菜销售。 1.1酶抑制法检测农药残留原理 有机磷酸酯类（OPs）、氨基甲酯类（CBs）和拟除虫菊酯类是我国目前杀虫剂的三大支柱。其中，有机磷和氨基甲酸酯类占杀虫剂总量的70 %以上[3]，也是对人畜毒性较强的两类杀虫剂，是目前蔬菜中农药残留的控制重点。有机磷类、氨基甲酸酯类杀虫剂具有相同的作用靶标——乙酰胆碱酯酶(AchE) 。它们抑制动物体内的乙酰胆碱酯酶(AchE) 的活性，从而导致神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常的神经传导，甚至引起动物的中毒或死亡。根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留检测中，通过测定蔬菜提取液对AchE 的抑制之后，酶与底物结合状况，可以用来表征蔬菜提取液对酶活性的抑制作用，从而判断蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药是否超标。 酶抑制法通常是根据测定酶水解底物后产物的含量与标准品相比来进行定量测定，主要方法有以下4 种：1）Δp H 法。测定底物水解后产生的乙酸；2）电位滴定法。将底物经水解后产生的乙酸进行电位滴定；3） 压力测定法。测定底物水解后的产物乙酸与碳酸氢钠反应所放出的CO2气体压力；4）比色法。测定底物水解产物与显色剂反应后的颜色变化。 以比色法为例，如果提取液中含有有机磷类或氨基甲酸酯类农药，酶的活性就会被抑制，酶就无法水解底物，产生的水解产物就没有或很少，从而不显颜色或颜色变化很小。反之，如蔬菜提取液中无有机磷类或氨基甲酸酯类农药残留或很低，酶的活性就不会被抑制或抑制很少一部分，加入的底物就会被水解，与显色剂反应就会产生颜色或随时间变化颜色变化较大。用分光光度计测定吸光值随时间变化，计算抑制度，就可以判断蔬菜中有机磷类或氨基甲酸酯类农药的残留情况。 1.2 酶抑制法检测重金属原理 酶是维持生物体新陈代谢的重要催化剂，进入生物体内的重金属离子与体内某些酶的活性中心具有特别强的亲和力，使酶失去活性。酶抑制法测定重金属的基本原理就是进入生物体内的重金属离子与体内某些酶的活性中心具有特别强的亲和力，使酶失去活性。重金属离子与形成酶活性中心的巯基或甲巯基结合后，改变了酶活性中心的结构与性质，引起酶活力下降，从而使底物——酶系统产生一系列变化，诸如使显色剂的颜色、pH、电导率和吸光度等发生改变，这些现象可以直接用肉眼加以区别或通过电信号、光信号被检测到，这样就可以判断样品中是否有重金属存在[4]。 2 检测用酶 2.1 乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，AChE，EC3.1.1.7）是一种催化乙酰胆碱分解的水解酶，具有能被OPs和CBs类农药强烈抑制的特性。乙酰胆碱酯酶以多种分子形式存在，按其分子特征可分为球型（对称型）及尾型（不对称型）。球型又可以分为两个亚类，即与膜结合的疏水性蛋白及可溶性蛋白。不同分子型一线胆碱酯酶具有相同的催化活性及Km值，但电泳迁