伪狂犬病病毒鄂A株.PDF

__________________________________________________________________________ 畜牧兽医学报 ,2001 ,32 (2) ,129133 A cta V eterinaria et Zootechnica S inica 伪狂犬病病毒鄂 A 株 gG- / LacZ + 突变株的构建 周复春 ,陈焕春 ,方六荣 ,周 　锐 ,吴 　斌 ,何启盖 (华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室 ,武汉 430070) 摘 　要 : 以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A 株为亲本 ,提取其基因组 DNA ,克隆含 gG 基因的 Sph Ⅰ/ Kpn Ⅰ片段,然后将 LacZ 基因融合到 gG 启动子下游 ,得到重组质粒pUSKZ ,将重组质粒与鄂 A 株 基因组共转染 PK15 细胞 ,待细胞完全病变后 ,在 Xgal 存在下 ,作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和 PCR 扩增证实得到的是基因型为 gG- / LacZ+ 的重组伪狂犬病病毒。 关键词 :伪狂犬病病毒 ;鄂 A 株 ;gG- / LacZ+ 突变株 ( ) 中图分类号:S855. 3 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :0366 - 6964 2001 02 - 0134 - 05 ( ) 　　伪狂犬病病毒 Pseudorabies virus ,PRV 是引起动物伪狂犬病的病原 ,它属于疱疹病毒科 α [1 ] 的 疱疹病毒亚科 ,含有双链 DNA ,长约 150 kb ,糖蛋白 g G 是伪狂犬病病毒的主要糖蛋白 之一 ,也是伪狂犬病病毒的非必需糖蛋白。将伪狂犬病病毒基因组中的这类非必需基因缺失 或插入失活所获得的突变株具有与野毒株相似的生物学特性 ,但不能表达相应的蛋白质 ,在用 这些突变株免疫的动物体内就没有相应蛋白的抗体。在临床上用这些缺失病毒生产疫苗免疫 猪 ,结合 EL ISA 检验 ,即能将自然感染野毒的猪和疫苗株免疫猪区分开 ,从而为逐步淘汰自然 感染血清学阳性猪 ,建立健康猪群 ,使最终根除和消灭此病成为可能。目前这方面的研究主要 ( ) ( ) [2 ] 是 gE 缺失 L .Jacobs ,个人交流 和 gX g G 缺失 的标记疫苗的研究。在本研究中 ,将 LacZ 基因插入 g G 基因中构建了 g G- / LacZ + 突变株 ,LacZ 的插入为筛选重组病毒提供了显而易见 的标志 ,大大简化了操作步骤并提高了筛选与纯化的准确性。本研究所获得的 g G- / LacZ + 突 变株具有很好的应用前景 ,可以作为标记疫苗 ,为我国根除伪狂犬病提供了一个有力的工具。 1 　材料与方法 11 　毒株和细胞 　伪狂犬病病毒鄂 A 株 , 由本室分离鉴定并保存[3 ] 。P K - 15 细胞 ,本室保 存。 12 　质粒与菌株 　质粒 pBR322 、pUC18 购自华美生物技术公司。质粒 pADVBamHI7A 含有 g G 基因的部分编码序列、gD 基因全序列和 gE 基因的部分编码序列 , 由英国M. Banks 博士惠 赠。质粒pSPT18Z+ 含有 g G/ LacZ 表达盒 , 由德国 Thomas C. Mettenleiter 教授惠赠。大肠杆 菌 DH5α由本室保存。 收稿日期 ( ) 基金项目 :本课题为“九五”国家科技攻关计划生物技术资助项目 96 - C01 - 04 - 03