第六章热原的去除及验证.doc

热原的去除及验证 热原(Pyrogens)是微生的代谢产物。大多数细菌都能产生，致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌所产生的热原。霉菌甚至病毒也能产生热原。 含有热原的输液注入人体，大约半小时以后，就使人体发冷、寒战、体温升高、身痛、出汗、恶心呕吐等不良反应，有时体温可升至40℃，严重者出现昏迷、虚脱，甚至有生命危险。 热原反应的温度变化曲线，因热原种类不同而有差异。一般先经过一个短的潜伏期后，温度略微上升，然后又略微下降，接着又很快上升，并出现一个高峰，根据这种现象而导致一个假设：即细菌性热原本身不引起发热反应。但热原使多型核白细胞(polymorphonucler leucocyte)及其他细胞释放一种内源性热原(endogenous pyrogen)，虽然有人提出内源性热原可能是蛋白质或脂蛋白(lipoprotein)组成，但其确切组成尚未肯完，它作用于视丘下部体温调节中枢，可能引起5-羟色胺的升高而导致发热[1]，热原的致热量因菌种而异，由于注射途径不同，引起发热反应的程度也有差异。 1.热原的组成 热原是微生物的一种内毒素，它存在于细菌的细胞膜和固体膜之间。内毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白质所组成的复合物，其中脂多糖(lipopolysaccharide)是内毒素的主要成分，具有特别强的热原活性，因而大致可以认为内毒素=热原=脂多糖。脂多糖的化学组成因菌种不同而异，从大肠杆菌分出来的脂多糖中有68%～69%的糖(葡萄糖、半乳糖、庚糖、氨基葡萄糖、鼠李糖等)，12～13%的类脂化合物，7%的有机磷和其它一些成分。热原的分子量一般为10(105 左右。 热原的结构 2.热原的性质(1)耐热性 一般说来，热原在60℃加热1小时不受影响，100℃也不会发生热解，在180℃3～4小时，250℃30～45分钟或650℃1分钟可使热原彻底破坏。虽然已经发现某些热原具有热不稳定性，但在通常注射剂灭菌的条件下，往往不足以使热原破坏，这点必须引起注意； (2)滤过性 热原体积小，约在1～5nm之间，故一般滤器均可通过。即使微孔滤膜，也不能截留。但活性炭可以吸附热原； (3)水溶性 热原能溶于水； (4)不挥发性 热原本身不挥发，但在蒸馏时，往往可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水，故应设法防止； (5)吸附性 热原对许多分子有亲和性，优其是蛋白质类，因此较难去除。 (5)其它 热原能耐受酸碱和化学试剂的处理，但热原能被强酸、强碱破坏，也能被强氧化剂如高锰酸钾或过氧化氢所钝化，超声波也能破坏热原。热原对干涸.污染热原的途径(1)从溶剂中带入 这是注射剂出现热原的主要原因。蒸馏器结构不合理，操作不当，注射用水贮藏时间过长都会污染热原。故应使用新鲜注射用水，最好随蒸随用； (2)从原料中带入 容易滋长微生物的药物，如葡萄糖因贮存年久包装损坏常致污染热原。用生物方法制造的药品如右旋糖酐、水解蛋白或抗生素等常因致热物质未除尽而引起发热反应； (3)从容器、用具、管道和装置等带入 因此在生产中对这些容器用具等物要认真处理，合格后方能使用； (4) 制备过程中的污染 制备过程中，由于室内卫生条件差，操作时间长，装置不密闭，均增加污染细菌的机会，而可能产生热原； (5)从输液器带入 有时输液本身不含热原，但仍发现热原反应。这往往是由于输液器具(如输液吊瓶、胶皮管等)污染所致。 4. 热原的除去方法 除热原的定义是除去所有使病人体温升高的物质。制药生产中指除去内毒素。除热原的方法主要有物理去除，钝化。 物理去除法包括反渗透法、蒸馏法、超滤法、 活性炭吸附法、疏水 80oC再循环温度。 （2）超滤法 超滤的原理通常认为是分子筛，其有效性与筛的大小有关。LPS 的分子量约为 10,000 -20,000道尔顿，因此可以被10,000道尔顿的超滤膜除去。实际上热原聚合物的分了量约100,000道尔顿,所以0.1 um的滤膜通常能有效的除去热原。 （3）活性炭吸附法 古老的方法之一，很早就有文献记载。活性炭对热原有较强的吸附作用，同时有助滤脱色作用，所以在注射剂中使用较广。常用量为0.1%～0.5%。此外还可用活性炭与白陶土合用除去热原。活性炭适用的pH范围较宽，不受电解质浓度影响。这种方法在制剂应用较广，如生理盐水，葡萄糖和抗生素等的除热原。缺点是对某些活性成份有吸附。 （4）疏水吸附法 很多的脂肪族聚丙烯聚乙烯聚偏二乙烯聚四氟乙烯pH 2.0时原热带负电其行为像阴离子，因此滤膜中使用阳离子吸附热原。也利用滤膜中纤维分支与热原的碰撞、沉积Polymixin B，Substrate Analogue Sepharose