重组人表皮生长因子的稳定性.docVIP

 重组人表皮生长因子的稳定性 陆 兵 谢英华 汤国营 戴红梅 朱厚础 (军事医学科学院生物工程研究所 北京 100071) 摘要 考察了不同条件下重组人表皮生长因子 ( rhEGF) 的稳定性 。结果表明 ,不同的保存条件 ( 物理状态 、温度 、 p H、浓度等) 对 rhEGF 的稳定性有显著影响 ,使用适当的添加剂 ( 保护剂 、抗氧剂 、抑菌等) 可以提高 rhEGF 的稳定 性 。上述结果为 rhEGF 的制剂学研究提供了依据 。 关键词 重组人表皮生长因子 ,稳定性 The sta bil ity of recombinant human epidermal gro wth factor LU Bing , XIE Ying2Hua ,TANG Guo2Ying ,DAI Hong2Mei , ZHU Hou2Chu ( Institute of Biotechnology , Academy of Military Medical Sciences , Beijing 100071 , P. R . China) Abstract The stability of recombinant human epidermal growth factor ( rhEGF) under different circumstances was investigated. It was indicated that the different storage condition (physical state , temperature , p H and drug concentration) had significant effect on the stability of rhEGF. Some additives ( such as protectants , antioxidants , and bacteriostats etc . ) could inhibit activity loss of rhEGF , and could be used as stabilizing agents in rhEGF preparations. Such result give an important basis for the pharmaceutical research of rhEGF. Key words recombinant human epidermal growth factor , stability 表皮生长因子 ( epidermal growth factor , EGF) 自 被发现以来 ,通过 30 多年的深入研究 ,人们已经对 它的结构 、功能 、受体及作用机理等有了较为深入的 了解1 。关 于 EGF 的 稳 定 性 也 有 许 多 相 关 报 赠) ,D2甘露醇 ( Sigma Ultra ,美国 SIGMA 公司) , 牛血清白蛋 白 , Fraction V ( 白蛋白含量 98 %～99 % ,美国 SIGMA 公司) , 尼泊金乙酯 、尼泊金丙酯 、山梨酸 、曲拉通 X2100 为化学纯 。 其余试剂均为分析纯 。 1. 2 rhEGF 的放射免疫分析 ( RIA) rhEGF 标准品 (试剂盒内装) 用缓冲液 ( 试剂盒内装) 分 别稀释至 0. 062 5 、0. 125 、0. 25 、0. 5 、1. 0 、2. 0 、4. 0 ngΠml ,取 0. 1 ml 不同浓度标准液 ,按试剂盒描述方法测定相应各管每分 道2 ～4 一1 ,5 ,并认为 EGF 是已知的最稳定的蛋白多肽之 。为了加深对重组人 EGF ( rhEGF) 稳定性的认 识 ,并为其制剂学研究提供准确可靠的依据 ,我们从 制剂学的角度出发 ,对影响 rhEGF 稳定性的因素进 行了较全面的研究 ,以期明确影响 rhEGF 稳定性的 主要因素 ,指导 rhEGF 的制剂学研究 。 钟的放射活性计数 (cpm) ,并以仪器内置程序绘制标准曲线 。 rhEGF 样品用试剂盒缓冲液稀释至 1 ngΠml 左右 ,取 0. 1 ml 样 品液同法测定 cpm ,并直接由放免仪通过标准曲线计算样品 液中 rhEGF 的浓度 ( ngΠml) , 再根据稀 释 倍 数 计 算 原 样 品 中 rhEGF 的浓度 。 1. 3 温度和 p H 对 rhEGF 稳定性的影响 rhEGF 原料 ( 冻 干 粉) 加 水 溶 成 约 200 μgΠml 后 , 分 别 用 p H 1. 2 (8. 35 ml 盐酸加水至 1 000 ml)