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Livin在妊娠滋养细胞肿瘤中表达和意义 　　[摘要] 目的 通过检测凋亡抑制蛋白Livin在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达，并讨论与妊娠滋养细胞肿瘤的临床特征的相关性，为妊娠滋养细胞疾病提供新的诊断及治疗思路。方法 采用免疫组织化学 SABC法检测Livin在22例妊娠滋养细胞组织（14例侵蚀性葡萄胎，8例绒毛膜癌）中的表达，并以10例正常早孕绒毛组织作对照组。结果 Livin蛋白在侵蚀性葡萄胎中表达率为 57.1%，绒毛膜癌中表达率为87.5 %，正常绒毛组织中为10.0%；Livin蛋白在妊娠滋养细胞肿瘤中的高表达与正常绒毛组织中的表达差异具统计学意义（P 　　妊娠滋养细胞肿瘤是一类严重威胁女性生殖健康的疾病，目前，主要靠动态观察血β-HCG的变化及临床症状、体征来诊断GTN及预测起恶变及预后，但这些临床特点的出 现，具滞后性，甚至延误治疗[2]。因此，寻找新的治疗药物和有效的预后标记物，以及攻克本疾病仍需要不断进一步的研究。随着分子生物学技术的发展，研究发现多种因素参与其发病过程，比如癌基因、抑癌基因，凋亡因子，抑制凋亡因子等。 凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins，IAP）是一类内源性细胞抑制因子，在很多物种中起抑制凋亡的作用，其过度表达引起凋亡不足、增殖过度，与肿瘤的发生密切相关。寻找有效的IAP抑制剂，在肿瘤的治疗中有着广泛的应用前景[3-4]。Livin（又称KIAP，ML-IAP）是最新发现的一个IAP家族中的成员，因其在肿瘤组织中的特异性高表达，已经成为近期研究的热点[5-6]。目前研究表明多种凋亡相关基因参与妊娠滋养细胞疾病的发生、发展，但Livin蛋白在妊娠滋养细胞疾病中的表达以及相关性的研究却鲜有所见。 1 资料与方法 1.1 一般资料 22例妊娠滋养细胞肿瘤患者病例均来自1993年1月～2006年1月西安交通大学医学院第一附属医院。患者均为女性，年龄最小21岁，最大53岁，平均32.6岁。手术治疗的侵蚀性葡萄胎患者的标本14例，手术治疗的绒癌患者的标本8例。并随机选择正常妊娠（5～12周）行人工流产终止妊娠者的绒毛组织（正常绒毛细胞组）10例作为对照。全部病例均经组织病理学证实。 1.2 主要试剂 兔抗人Livin多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。兔SABC检测试剂盒（SP-9001）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3 实验方法 取上述病例蜡块切片，厚4μm，采用免疫组织化学链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物（SABC）法检测。阴性对照：以磷酸盐缓冲液（PBS）代替第1抗体；阳性对照：用已知阳性染色切片作阳性对照。 1.4 结果判定 每张切片选择有代表性的区域，并避开切片周边区域，观察阳性反应采用双盲法，并由有经验的病理科医师观察每张切片后一起做出判断。以滋养细胞胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性，每张切片显微镜下随机观察10个视野，高倍镜（×400）下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定。染色强度评分标准：染色强度以不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞数50%为3分。 染色强度×阳性细胞百分数为每例组织染色的综合记分。0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～6分为阳性（++），6分为强阳性（+++）。 1.5 统计学方法 采用SPSS13.0 软件包进行统计学分析，用四格表Fishers确切概率法和Spearman等级相关分析对数据进行处理，以PⅠ期Ⅲ期，Livin与GTN患者的年龄、前次妊娠是否为葡萄胎、治疗前HCG值的高低、是否有转移及预后无明显相关性（P0.05）。 表2 Livin 在GTN中的表达与临床特征的关系 项目 例数 Livina 阳性率（%） P - + 年龄（岁） 22 7 15 68.2 0.423 ≥40 8 3 5 62.5 　　105 4 1 3 75.0 分期 0.045 Ⅰ期 9 2 7 77.7 Ⅱ期 5 0 5 100.0 Ⅲ期 8 5 3 37.5 预后 1.000 低危 16 5 11 68.8 高危 6 2 4 66.7 近十年来，妊娠滋养细胞疾病的分子生物学研究取得很大的发展，众多学者已经发现多种肿瘤标志物，与GTN的发病发展有关，包括：白介素、肿瘤坏死因子、血管内皮生长因子、增殖性标志物中的PCNA、Ki-67、金属蛋白酶及其抑制物以及癌基因、抑癌基因等[7]。 图1 Livin在正常绒毛中的阳性表达（×400） 图2 Livin在侵葡中的阳性表达（×400） 图3 L