家蚕蛋白酪氨酸磷酸酶基因克隆表达纯化与结构分析-微生物学报.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 何华伟 等/家蚕蛋白酪氨酸磷酸酶基因克隆、表达纯化与结构分析 1827 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn November 25, 2017, 33(11): 1827−1839 DOI: 10.13345/j.cjb.170044 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·农业生物技术· 1,2 1,2 1 2 1 1 1 何华伟 ，王叶菁 ，宋凯 ，王姣 ，位曙光 ，赵朋 ，赵萍 1 西南大学 家蚕基因组生物学国家重点实验室，重庆 400715 2 西南大学 生物技术学院，重庆 400715 何华伟, 王叶菁, 宋凯, 等. 家蚕蛋白酪氨酸磷酸酶基因克隆、表达纯化与结构分析. 生物工程学报, 2017, 33(11): 1827–1839. He HW, Wang YJ, Song K, et al. Cloning, expression, purification and structure analysis of protein tyrosine phosphatase of Bombyx mori . Chin J Biotech, 2017, 33(11): 1827–1839. 摘 要: 蛋白酪氨酸磷酸酶 (Protein tyrosine phosphatase, PTP, EC 8) 特异性地催化去除磷酸化修饰的 酪氨酸残基上的磷酸基团，导致蛋白去磷酸化，从而调控了细胞生长、增殖、分化和免疫等生命活动。家蚕 Bombyx mori 蛋白酪氨酸磷酸酶h (BmPTP-h) 参与了核型多角体病毒 (Nucleopolyhedrovirus ，NPV) 在家蚕体 内的复制过程，但目前对于BmPTP-h 结构和性质的了解并不多。本文从家蚕中肠克隆了BmPTP-h 基因编码序 列，分析了BmPTP-h 的基因组结构、mRNA 结构、序列特征、二级结构和溶液中的状态。同源氨基酸序列比 对分析表明 BmPTP-h 与多种昆虫NPV 的PTP 序列具有高相似度，暗示了它们可能具有共同的起源和相似的 功能。文中构建了原核表达载体，通过大肠杆菌在25 ℃下表达获得了可溶性的重组BmPTP-h ，利用Ni-NTA 亲和层析纯化了BmPTP-h 。凝胶过滤分析显示BmPTP-h 在溶液中可以形成聚集体和单体。圆二色光谱分析显 示重组的BmPTP-h 包含α螺旋结构，升高温度导致BmPTP-h 的α螺旋结构去折叠，α螺旋结构含量下降。这 些研究为深入研究BmPTP-h 的结构和调控机理提供了基础。 : 家蚕，蛋白酪氨酸磷酸酶，克隆，表达纯化，结构 Received: February 14, 2017; Accepted: May 31, 2017 Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos. , State Key Program of National Natural Science of China (No., Chongqing Research Program of Basic Research and Frontier Technology (Nos. cstc2015jcyjA00040, cstc2015jcyjBX0035), Fundamental Research Funds for the Central Universities (No. XDJK2013A019), Start-up Grant from Southwest