染色体终端与染色体终端.PDF

目錄 中文摘要 ……………………………………………………………. 2 英文摘要 ………………………………………………………… 4 緒言 一、 染色體終端與染色體終端 ………………………………. 6 二、 染色體終端 與細胞的老化之間關係 ………………… 9 三、 染色體終端 與細胞腫瘤之間關係 …………………...….11 四、 台灣肺癌 …………………………………………………15 研究動機 …………………………………………………...………...17 實驗材料 ………………… …………………………………………..19 實驗方法 ……………………………………………………………..22 實驗結果 …………… ……………………………………………..35 實驗討論 ……………………………………………………………..42 圖表與圖表說明 ……………………………………………………..53 參考文獻 ……………………………………………………………..69 1 摘要 染色體終端序列（telomere）位於染色體兩端，由簡單重複核 酸序 列（TTAGGG ）所組成，可提供染色體完整性及穩定性，避免與其他 染色體發生融合或重組現象而引起染色體結構改變。染色體終端 （telomerase）是一種核糖核蛋白複合酵素，主要是由蛋白質及RNA 成分所組成，染色體終端 會以本身RNA 分子當作模版來複製終端 序列，使染色體終端延長並穩定染色體結構。在人體很多器官的癌化 組織多會表現出染色體終端 活性，與人類腫瘤有著密切相互關係， 但在正常體細胞卻很少有此酵素的活性，顯示此酵素活性的表現可能 和細胞癌化有關。終端 的活化在細胞的不死及癌化扮演著關鍵角 色。在本研究中，分別使用 TRAP 反應及 RT -PCR 方法測人類非小 細胞肺癌 (NSCLC) 的終端 活性及反轉錄酵素次單元 h.TERT mRNA 。研究結果顯示終端 在肺癌細胞株（H1299 ）有活性表現， 而在正常肺細胞（MRC-5 ）則無此酵素活性，另外在 28 例台灣非小 細胞組織有 24 例被證明含有終端 活性（佔 85% ）。反轉錄催化次單 元是終端 活性表現的速率決定步驟，利用 RT-PCR 來偵測肺癌 hTERT mRNA 表現，結果在三株肺癌細胞株（H1299 、A427 及 CL-3 ） 均有表現，在正常肺細胞MRC -5 則沒有 hTERT mRNA 存在。另外在 56 例台灣非小細胞組織有 45 例被證明含有 hTERT mRNA （佔 2 80% ）。雖然終端 活性與腫瘤相關性陸續被研究證實，但如何被活 化及調節，此機制尚未清楚的被瞭解。因此本研究利用基因選殖方 式，選殖出 RNA 模版啟動子（tel-p ）及反轉錄催化次單元 (tert-p) 。 利用共同轉染方式將Bcl-2 、B[a]P 或者野生型 p53 和含有螢光酵素活 性的載體，送入肺癌細胞株 (H1299) ，結果顯示出，Bcl-2 與 B[a]P 會活化 tel-p 轉錄活性而 p53 則有抑制現象，但是在tert-p 則沒有活化 或抑制其轉錄的情形。藉由測定終端 活性，來診斷及追蹤肺癌，並 且瞭解其作用機制，研發新的治癌方法，可能在未來治療肺癌上扮演 著不可或缺的重要角色。 3 ABSTRACT Telomere are the distal ends of human linear chromosome composed of tandem of sequence TTAGGG. T