液态发酵菌丝体溶剂萃取物对ACE抑制活性之影响.DOC

不同菇類菌絲體萃取物ACE抑制活性之探討 研究生：葉怡妏 指導老師：楊芳鏘 摘要--本研究探討四種食藥用菇類菌絲體（朱紅栓菌、靈芝、樟芝與雞腿蘑）萃取物的ACE抑制活性功能，期待以此開發出新的抗高血壓保健食品。本研究方法先是分別以深層培養與固態培養方式得到菌絲體，並製成不同溶劑之萃取物與酵素水解物，另外再探討朱紅栓菌與雞腿蘑之自體溶解反應，用以測定ACE抑制活性。研究結果顯示，當以深層發酵方式培養菌絲體時，四者皆是以冷水萃取物有較高的ACE抑制活性，分別為69.4%、57.2%、26.8%與15.2%，其IC50則為2.45、4.13、9.28與13.5 mg/ml；在固態培養方面，選用了薏仁、燕麥與蕎麥作為培養基質，再分別以冷水、甲醇和乙醇萃取菌絲體，其中以冷水萃取物抑制活性較高，而乙醇萃取物是無抑制活性，並且朱紅栓菌、靈芝與樟芝以薏仁為培養基質時有最高之抑制活性，雞腿蘑則是以燕麥培養時有最高之抑制活性。探討朱紅栓菌之自體溶解反應對抑制活性的影響，發現其受pH影響較大，在酸性環境下可釋放出較多有抑制活性之物質，且最佳作用溫度為50℃。另外以酵素水解方式探討其ACE抑制活性，選用papain、bromelain與alcalase水解朱紅栓菌菌絲體，結果顯示alcalase作用效果最佳，其抑制活性可達82.3%。由以上結果得知，朱紅栓菌比其他三者有較高之ACE抑制活性，可作為日後開發保健食品之另一項新選擇。 關鍵字：菇類菌絲體、抗高血壓、ACE抑制劑、朱紅栓菌 一、緒論 高血壓已為開發中國家所盛行的慢性疾病之一，因其初期症狀不明顯往往容易被忽略，而有隱形殺手之稱。長期的高血壓會導致血管硬化、阻塞或破裂而造成中風，並會有心臟病變及腎臟病變等併發症，嚴重者可能因心肌梗塞而猝死。在臨床上的治療方式，大都以服用合成的抗高血壓藥物，如利尿劑、ACE抑制劑等，但此類藥物通常會有咳嗽、過敏、味覺改變、皮膚紅疹等副作用。 食藥用菇類不僅營養價值高而且熱量極低，符合現代人對健康食品的需求，更有多項的生理活性功能，以達到不同的保健功效。因此菇類可開發之市場除了生鮮食品市場外還有更具經濟價值之保健食品市場。本研究目的即是希望從食藥用菇類製備ACE抑制劑，達到抗高血壓的效果，以增加其市場經濟價值。並藉由不同的培養方式（固態與液態發酵）與萃取方法得到不同的菌絲體萃取物，比較其ACE抑制劑功效。 二、文獻回顧 2-1 菇類的生理活性與功能 研究顯示食藥用菇類除了可作為營養素供給源（蛋白質、醣類、脂質、礦物質等）外，還有許多生理調節機能，如增強免疫力、抗腫瘤、抗老化、降血壓等功能，由食藥用菇菌種分離、培養、液體發酵、藥效成分萃取、藥理分析、毒性試驗與臨床研究，現今已發展出約二十種的商業化產品，例如：雲芝的多醣體－胜肽抗癌劑、香菇的多醣體保肝劑，猴頭菇製成的健胃整腸錠片、蜜環菌治頭痛眼花的藥劑、假蜜環菌製劑用於治療膽道急性感染、安絡小皮傘製劑用以醫治神經性疼痛、靈芝鎮靜劑，以及銀耳（白木耳）的抗放射線麻藥和蘑菇醫治肝炎、早期肝病變的藥物等（王，2007）。 由現代的分離與分析科技得知，菇類有許多生理活性成分，如多醣體（polysaccharide）、三萜類（triterpenoids）、蛋白質、固醇類（steroids）、核酸、超氧歧化酵素（superoxide dismutase）等。其生理活性功能有：抗腫瘤、降血壓、抗病毒、抗氧化、降膽固醇與增強免疫等。 2-2 菇類菌絲體的培養方式 根據統計，目前已知可食用之菇類約有2,000多種，其中80 餘種可以人工化栽培，但只有40 多種具有經濟價值，而已商業化栽培的約有22 種。其中在子實體的栽種上，由於需消耗大量人力、栽培空間與設備，以及由接種到子實體收成需長達數餘月的時間，因此在加強食藥用菇類的利用方面，另有液態深層發酵與固態發酵等方式以生產菇類菌絲體及其他有用之代謝產物及酵素。 2-2-1 液態發酵 所謂的液態深層發酵，一般是指使用固定組成的液態培養基，在控制適當的pH值、溫度以及通氣和攪拌（或震盪）的條件下，進行微生物的發酵培養以製造生質（biomass）或其他代謝產物（metabolite）。 2-2-2 固態發酵 固態發酵即是使用固態基質當作營養來源，在低含水量的環境下進行微生物發酵與培養，並有利於酵素與二次代謝產物的生產（Robinson et al., 2001）。主要提供微生物生長過程所需的碳源、氮源與其他微量物質等，通常使用穀類物質或是農業廢棄物作為固態基質，依據菌株的特性不同，選擇適合的固態基質種類與前處理方式（如顆粒大小、蒸煮方法、含水量等）。 2-3 高血壓 根據世界衛生組織(World Health Organization , WHO)所公佈，高血壓的定義為正常成年人收縮壓(