结果与分析-广西植物.DOC

DOI:10.11931/guihaia.gxzw201604017 广西柳树桑寄生内生真菌的分离鉴定 与抗肿瘤活性菌株筛选 龚斌1，巫鑫2，韦婷1，廖日权1，苏本伟3，宋静静1，江国焕1，朱开昕*3 （1. 广西钦州学院海洋学院，广西 钦州 535000；2. 广东医学院广东天然药物研究与开发实验室，广东 湛江 524000；3. 广西钦州市中医医院，广西 钦州535000） 摘要： 为了研究柳树桑寄生内生真菌种群及其抗肿瘤活性，该研究从广西钦州市采集健康的柳树桑寄生的根、茎和叶中分离并纯化内生真菌，对真菌进行形态学鉴定，提取内生真菌的DNA，采用真菌ITS序列对内生真菌进行分子鉴定。利用A549和H460细胞作为抗肿瘤活性指示细胞，采用MTT法测定真菌乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性。经过初步分离分析，从柳树桑寄生中纯化出27株内生真菌，经鉴定它们分别属于7个目9个属15个种。拟盘多毛孢属和间座壳属为优势属，其中拟盘多毛孢属全部定植于寄生根；其次为新壳梭孢属、拟茎点霉属和球座菌属，各分离到3株；其他包括青霉属、镰刀菌属、炭疽菌属和派伦霉属，各分离到1株。抗肿瘤活性研究表明，有一株与Pestalotiopsis protearum的ITS序列相似性达100%的拟盘多毛孢μg/mL时，对A549细胞的抑制率达到了56.92%，对H460细胞的抑制率达到了70.11%。研究表明，广西柳树桑寄生内生真菌较丰富，在寄主中的分布表现了一定的组织特异性，而且存在一些具有抗肿瘤活性的菌株及其活性物质可供深入研究。 关键词： 柳树，桑寄生，内生真菌，拟盘多毛孢基金项目国家自然科学基金项目；广西自然科学基金项目（2014GXNSFBA118135）；钦州市科技开发项目（201322034）upported by National Natural Science Foundation of China ; Guangxi Natural Science Foundation (2014GXNSFBA118135); Science and technology development project of Qinzhou (201322034)]。作者龚斌（1979-），男，湖北宜昌人，博士，副教授，从事微生物学和生物技术制药研究，（E-mail）342965691@。 *朱开昕，学士，高级工程师，从事天然药物及中药制剂研发， （E-mail）kaixinzhu908@126.com。 Guangdong Key Laboratory for Research and Development of Natural Drugs, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524000, China；3. Chinese Medicine Hospital of Oinzhou, Qinzhou 535000, China) Abstract：Taxilli Herba, the branches with leaves of Taxillus chinensis (DC.) Danser, is a traditionally used Chinese medicine. Taxilli Herba has been used to cure powerless bones and tendons, cancer, virus infection, rheumatic arthralgia and so on. However, the endophytic fungi of Taxilli Herba has never been studied previously. In this article, the diversity of endophytic fungi in Taxilli Herba from Salix babylonica Linn and their antitumor activity were researched. Endophytic fungi were isolated and purified from healthy stems, leaves and roots of Taxilli Herba from Salix babylonica Linn in Qinzhou, Guangxi, China. They were identified by morphological characterization firstly, and then the DNA of endophytes