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低温胁迫对转高山离子芥CbPLD基因烟草CAT和APX的活性影响 指导教师：杨宁 学生：赵聪聪 本研究以转入高山离子芥CbPLDα和CbPLDβ基因的烟草幼苗为材料，通过测定低温胁迫对CAT和APX的活性影响，探究高山离子芥CbPLDα和CbPLDβ基因的抗低温机制，为农作物的抗低温育种、 改善作物抗低温性提供理论依据。 实验目的及意义 实验材料：CbPLDα转基因烟草 CbPLDβ转基因烟草 野生型烟草 实验试剂：酶提取液、CAT反应液、APX反应液 实验仪器：GXZ智能型低温光照培养箱、AllegraTM-C型台式冷冻离心机、U2000紫外-可见分光光度计 材料处理 1 2 3 4 5 0h 6h 12h 24h 48h 6 72h 4 0 ℃ 酶活测定（） CAT活性测定：参照紫外吸收法。 APX活性测定：参照李忠光等的方法。 实验方法 实验结果 4℃低温胁迫对转基因烟草叶片中过氧化氢酶活性的影响 ０℃低温胁迫对转基因烟草叶片中过氧化氢酶活性的影响 实验结果 4℃低温胁迫对转基因烟草叶片中抗坏血酸过氧化物酶活性的影响 0℃低温胁迫对转基因烟草叶片中抗坏血酸过氧化物酶活性的影响 分析与讨论 在4℃和0℃胁迫温度下，随着胁迫时间的增加，CAT的活性均表现出先升高后降低的变化趋势，CAT活性升高可能是由于低温胁迫初期过氧化物自由基不断累积，诱导机体内产生了较多的CAT，以保护自身免受伤害。CAT活性达到最高之后的下降表现，可能是由于机体经过了一段时间的低温驯化，对低温产生一定适应性反应。0℃时转基因烟草中CAT活性相对于野生型烟草比4℃时转基因烟草酶活相对于野生型的变化更为明显，说明CAT对0℃胁迫响应更为积极。 分析与讨论 在4℃和0℃胁迫温度下，随着胁迫时间的增加，APX的活性均呈波动性变化，但都高于野生型，并分别在48h和72h时达到最大值。其中，在0℃胁迫温度下酶的活性明显大于4℃条件下的酶活，说明APX也对于０℃胁迫响应更为积极。APX活性在低温胁迫前后变化不太明显，我们推测CAT在低温胁迫清除过氧化氢机制应答中发挥主要作用，其对低温胁迫的响应强度远高于APX。 分析与讨论 在两种温度的胁迫条件下，转基因烟草幼苗中的CAT和APX活性均高于野生型烟草，表明转入磷脂酶D基因的烟草比野生型烟草有更强的抗低温性。我们猜测磷脂酶D基因和烟草的抗低温性有关CbPLD基因编码的磷脂酶D可能参与介导低温信号转导途径以及CAT、APX活性途径的调节，使CAT和APX的活性在植物受到低温胁迫时发生相应变化，从而使植物对低温环境做出积极响应。