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栀子不同部位中活性成分含量测定 　　摘要：目的 对生药栀子中几种活性成分进行定性定量分析，并对不同产地、不同部位中所含成分进行探讨。方法 采用液质联用技术对栀子水提取液进行活性成分测定。结果 中国产与日本产栀子中确定了京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷2种成分。不同产地栀子中主要成分含量稍有区别，但栀子果皮，种子等不同部位中主要成分含量与分布不同。结论 HPLC-MS/MS法可准确、快速、同时测定栀子中多种成分，对生药栀子的质量控制提供科学依据。 关键词：栀子；HPLC-MS/MS；京尼平苷；京尼平龙胆二糖苷 栀子（Gardenia jasminoides Ellis）：别名黄栀子、山栀、白蟾，是茜草科植物栀子的果实[1]，常用于蒙药、中药及日本汉方。蒙药药效：栀子蒙语名”朱如拉”，蒙药希拉汤和森登四味汤散的主要成分。具有清血热、明目、祛”巴达干协日”、生津、调元之功效[2]。中药药效：栀子的果实是传统中药，属卫生部颁布的第l批药食两用资源，具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用[1]。日本汉方药效：利胆、镇静、止血、解热为目的，用于精神不安、充血、黄疸等病状[3]。其化学成分主要含环烯醚萜类成分，如京尼平苷（geniposide）、京尼平龙胆二糖苷（genipingentiobioside）、羟异栀子苷（gardenoside）、京尼平苷酸（geniposidic acid）等[4]。笔者用HPLC-MS/MS法同时测定栀子中的活性成分，对其京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷2种成分进行了定性定量分析，结果已另文报道。本文对中国产和日本产栀子的成分含量进行对比，并对栀子的果皮、种子所含成分进行了分析。 1资料与方法 1.1仪器 高效液相色谱仪Prominence LC-20A（日本SHIMADZU）；液相色谱质谱联用仪API2000 LC/MS/MS三重四极杆质谱系统（美国AB SCIEX）；数控式超声波细胞粉碎器，SONOPULS UW2070，BANDELIN。 1.2试剂 色谱纯甲醇，（日本Wako）；蒸馏水，HPLC用蒸馏水；对照品：京尼平苷，（日本Wako，批212）；京尼平龙胆二糖苷，（四川省维克奇生物科技，批号130527）；栀子（购于内蒙古中山路药店和日本?口药店） 1.3方法 1.3.1对照品溶液制备 [对照品]对照品京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷分别配置1mg?ml-1的水溶液和1：1的混合对照品储备溶液，使用前再稀释100倍。 1.3.2供试品溶液制备 生药栀子研细，过60目筛，精密称取粉末0.5g，加超纯水10ml，超声 （70W、20kHz） 提取30min，高速离心机离心（3000rpm）20min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，既得。HPLC测定时再稀释1000倍后使用。 1.3.3色谱、质谱条件 [色谱条件] 色谱柱：ACE C8（100mm×2.1mm， 5μm）色谱柱；流动相：甲醇-水溶液（梯度洗脱）；流速：0.2 ml/min；检测波长：240 nm；柱温：30 ℃；进样量：0.5μl。 [质谱条件] 电离源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子检测；扫描范围：10～1100（m/z）。实验数据用AB SCIEX公司Analyst 1.4.2软件处理。 1.4方法学考察 1.4.1线性关系考察 精密吸取对照品京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷的溶液，用超纯水配制分别为0.1、1、5、50、100 mgml-1等不同浓度的对照品溶液，每个浓度平行进样测定3次。以对照品浓度X（mgml-1）为横坐标，以色谱峰峰面积Y为纵坐标制作标准曲线。求得京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷的直线回归方程及相关系数（r）分别为： y=22863x-1045.2 r=1.000 00 y=18471x-3431.9 r=0.999 98 京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷均在0.1～100 mgml-1浓度范围内呈现良好的线性关系，分析方法学效能指标满足定量分析方法验证要求。 1.4.2加标回收率 精密吸取供试品溶液，分别添加低、中、高3个浓度的混合对照品溶液，进样0.5μl进行测定。每个添加水平测定5次，计算京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷的平均加样回收率，见表1。 2结果 2.1对照品测定 取对照品溶液各0.5 μl注入高效液相色谱仪中，进行HPLC-MS测定。对照品的色谱图中京尼平苷和京尼平龙胆二糖苷的保留时间分别为15.23 min和14.16 min（图1A、B），质量电荷比分别为410.8 m/z，amu和572.9 m/z，amu（图1C、D）。对照品的准离子峰进行MS/MS测定，二级质谱碎片离子中分别测得质荷比2