石斑鱼神经坏死病毒DNA疫苗之开发.PDFVIP

■ 成 果 報 告 行政院國家科學委員會補助專題研究計畫 □期中進度報告 石斑魚神經壞死病毒DNA疫苗之開發 計畫類別：■ 個別型計畫 □整合型計畫 計畫編號：NSC93 －2313 －B －002 －057 執行期間：93 年8 月1 日至94 年7 月31 日 計畫主持人：陳秀男 教授 共同主持人： 計畫參與人員： 成果報告類型(依經費核定清單規定繳交) ：■精簡報告 □完整報告 執行單位：臺灣大學漁業科學研究所 中 華 民 國 94 年 10 月 31 日 1 中英文摘要 計畫中文摘要： 本計畫針對感染石斑魚的神經壞死病毒(Nervous Necrosis Virus ；NNV) ，以市售的RNA 抽取套組(Trizol) ，抽取其RNA ，進而利用針對病毒RNA2 的專一性引子，以RT-PCR 的方 式增殖病毒蛋白質鞘的基因片段，再與含真核生物啟動子的表現質體(pTarget T mammalian Express vector)接合，將此質體轉形(Transform)至大腸桿菌中，培養後純化含有病毒鞘蛋白 基因的大腸桿菌質體，以此質體為疫苗轉移感染(Transfer)至石斑魚腦細胞株(GBC1) ，以西 方雜交式判斷此細胞株是否產生神經壞死病毒的蛋白質鞘，以體外的方式(In vitro)探討此疫 苗的效果。實驗結果顯示：利用專一性引子NNV-F 及NNV-R 可有效的增殖病毒蛋白質鞘 片段基因，其產物約 1345bp ，包含完整的增殖病毒蛋白質鞘基因，此段DNA 經與質體結 合後轉形(Transform)至大腸桿菌中，純化的質體以Lipofectin 及電穿透作用(Electroporation) 皆可有效的送入GBC1 細胞株中，利用大鼠抗NNV 抗體以西方雜交的方式，可確認細胞 產生病毒鞘蛋白約42KDa ，因此可應用至魚體實驗，進而利用此DNA 疫苗處理石斑魚苗， 以防治NNV 的感染。 Abstract ： Nervous Necrosis Virus (NNV) has been demonstrated to be main causes for the cultured marine fish worldwide. In recent decade, Taiwan, cultured groupers have been found to be infected by NNV with a massive mortality especially for the horal fish. The present study attempts to develop the DNA vaccines for protect NNV infection in marine fish. It is successful to ext