双向电泳技术在筛选膀胱癌特异标志蛋白中的应用.PDFVIP

维普资讯 医 杂星 20 年5月第 29卷第5期 ChinJlabMed，May2006．Vol29．No．5 · 4_45 · · 基 础 实验 诊 断研 究 ． 双向电泳技术在筛选膀胱癌特异 标志蛋 白中的应用 靳胜 张曼 张秀敏 许华林 张敏 郝林 【摘要】 目的 建立高分辨率的膀胱移行上皮癌不同时期的双向凝胶电泳图谱，并初步分析其 蛋白质表达情况，寻找其差异表达蛋白，为寻找癌变相关蛋白奠定实验基础。方法 用固相pH梯度 双向凝胶电泳技术分离膀胱移行上皮癌不同分期的组织，凝胶考马斯亮蓝染色，然后利用 GS-800 CalibratedDensitometer凝胶成像系统获取图像，用PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检 测、匹配、斑点位置重复性的系统分析，寻找差异表达蛋白。在此基础上应用基质辅助激光解析电离 飞行时间质谱 (MALDI—TOF)得到相应的肽质指纹图谱，然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱 ，三块胶的平均蛋白质匹配率达76％，蛋 白质点在位置上有较好 的重复性，不 同胶问的蛋 白质点在等 电聚焦 IEF方 向偏差是 (0．98± 0．26)mm，SDS—PAGE方向偏差是(1．23±0．22)mm，并且得到 了若干与细胞增生 、分化、周期调控信 号转导或肿瘤发生有关的蛋白质，例如SFN，热休克蛋白一27等。结论 为进一步探讨癌变机理及筛 选其特异性分子标志物打下方法学基础。 【关键词】 电泳，凝胶，双向；膀胱肿瘤；蛋 白质组 Two-dimensionalelectrophoresisforthescreeningofbiomarkerincarcinomasoftheurilli~ bladder 删 Sheng，ZHANGMan，ZHANGXiu—min，XUHua—Z ，ZHANGMin，HAOLin．CenterofClinicalLaboratory ofBeijingSh驰anHospital，Be~iing100038，China Correspondingauthor：ZHANGMan，Tel：010 A【bstract】 Objective Thisstudywasdesignedtoestablishandoptimizethetwo—dimensionalgel electrophoresisf2．DE)fortheproteomeanalysisofhumanTransitiona1Cel1CarcinomasoftheUrinary Bladder．andtoestbalishedthewto—dimensionalgelelectrophoresis(2一DE)profileofhumanTransitional CellCracinomasoftheUrinaryBladder(TCC)ofdifferentstagesincarcinogenicprocess．Thebasicaim isto perforIn differential analysis and provide a basis ofr identifying carcinogenesis—associated protein of TCC．M ethods Afterobtaining samplesoftIlenormal，invasive tissue，nonlnvasive tissue，a seriesof methodsSuchassamplepreparation，eleetrophoreslspraameters，gelconcentration，PDQuest2DEnaalysis softwrae．peptidemassfingerprint(PMF，MAI I—T0F—MS)wereusedtonaalysesthesetissues．Results Th egood2DE patternsof differenttissuesincludin